艾滋病抗体检测技术

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1、HIV抗体筛查方法疾病预防控制中心2009年HIV的感染机制简述HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。迄今为止，根据血清学反应和病毒核酸序列测定，全球流行的HIV可分为2型：HIV-1型和HIV-2型。在HIV-1型内，根据编码包膜蛋白的env基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性又进一步分为3个组：Ｍ组（主要组）、Ｏ组（外围组）和Ｎ组（新组或非M非O组），Ｍ组内又可分为Ａ-Ｊ10个亚型。在HIV-1型和HIV-2型之间,其核苷酸序列有45％-50%的同源性，并且存在免疫交叉反应。应用免疫印迹法(Westblot)可以将二者明确地区别开来。HIV的感染机制简述

2、HIV-1和HIV-2型虽然都起源于非洲，但HIV不同型，不同组甚至不同亚型在全球流行是不均一的。HIV-1的O组，N组和HIV-2型只局限在非洲某些局部地区流行。而HIV-1的M组病毒呈全球性流行。到目前为止，全球流行的绝大多数毒株是HIV-1M组中的A、C亚型毒株，接着是B亚型毒株，然后是A/E和A/G亚型重组毒株。进一步的分子流行病调查表明，在非洲几乎流行了HIV的所有亚型，但以A和C亚型为主，同时，也正由于众多亚型的共流行，那里也是发生病毒重组最多的地方。在北美、欧洲和澳大利亚，B亚型仍然是最常见的亚型，虽然M组的其它几个亚型、甚至O组病毒已经在美国和欧洲几个国家有报道，但进一步

3、的现场流行病学调查证实，这些人中的大多数是来自非洲的移民。在南美，B亚型占有优势，但C、F亚型也有流行。在阿根廷和巴西有B/F重组毒株的报道。在亚洲，好几种不同的HIV-1亚型流行于不同区域，在印度C亚型占主导，同时有A、B亚型共流行和A/C亚型重组毒株的报道。在泰国则有二种独立的亚型流行，B亚型和E亚型（即A/E亚型重组毒株）。在我国主要以B、C和E亚型流行，但同时也A、F和HIV-2型的报道。HIV的感染机制简述HIV病毒侵入人体后，其表面糖蛋白gp120与细胞表面受体蛋白CD4以高亲和力结合，吸附到宿主细胞上；gp120再与宿主细胞表面辅助受体相互作用，使病毒与宿主细胞膜更接近；g

4、p41产生一系列构象变化，其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜，导致病毒包膜与细胞膜的最终融合，病毒RNA进入细胞。在HIV感染后，最先能够监测到病毒RNA、然后是p24抗原，最后是抗体。HIV的感染机制简述在感染后的10～14d内，病毒RNA水平是呈指数上升，随后下降并保持在持续稳定的水平上，进入HIV无症状期p24抗原水平随着病毒RNA水平的发展而发展，在急性感染期就可以出现，被认为是病毒复制的间接标志，但由于检测方法的灵敏度不够而使得其检出时间要比RNA晚。HIV的感染机制简述窗口期概念：从HIV感染到能够检测出HIV抗体这一时期,被称作“窗口期”。在窗口期，只有通过病毒RNA、p24

5、抗原和CD4淋巴细胞水平来确定HIV感染。CD4淋巴细胞水平随着感染的发展而逐渐下降,当其在血液中细胞下降到200个/mm3时，就会发生严重的免疫缺陷，患者就被确诊为艾滋病。病毒RNA、p24抗原、HIV抗体和CD4淋巴细胞水平可以用来确定HIV感染、检测病情发展。HIV感染的主要检测方法目前检测HIV的方法有100多种，总体来说可以分为抗体检测和病毒检测两大类。早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体,间接地诊断HIV感染。病毒检测包括p24抗原检测、细胞培养(病毒分离)和病毒核酸检测。抗原能够在个体感染后先于血清转化2～18d被检测到。因此，在血清转化期通过检测p24

6、抗原有着很大的优势，可以作为早期辅助诊断HIV感染的一种方法。HIV感染的主要检测方法病毒培养是检测HIV感染最精确的方法。一般采取培养外周血单个核细胞(PBMC)的方法进行HIV的诊断。在窗口期可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。病毒核酸检测通常是通过检测HIVRNA水平来反映病毒载量，具有很高的灵敏度，使用适时荧光聚合酶链反应(PCR)技术，能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。病毒核酸检测方法可用于HIV的早期诊断，如窗口期辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效测定、预测疾病进程等。目前常用的测定方法有逆转录PCR实验(RTPCR)、核酸序列扩增实验(NASBA)、分支DNA杂交实

7、验(bDNA)等。近几年，分子生物学方法不断被应用到HIV的检测中，HIV的实验室诊断方法取得了很大的进展，核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向。HIV感染的主要检测方法抗体通常是在感染后3～8周能够被检测出来，在窗口期，病毒抗体不能被检出。抗体检测由初筛和确认试验组成，目前，大多应用双抗原夹心法进行抗体筛查，这种方法具有很好的灵敏性和特异性。酶联免疫吸附分析(ELISA)方法有一定的灵敏度，且操作简单、快速，适合对大量样品