高效液相色谱-魏芸

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1、液相色谱基础知识二、定义色谱法(Chromatography)：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术。色谱法的分离原理利用样品混合物中各组分理、化性质的不同以及在两相间分配系数的差异,当两相相对移动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物得到分离。两相中，固定不动的一相称固定相(Stationaryphase)；移动的一相称流动相(Mobilephase)，携带样品流过整个系统的流体。色谱发展史◆100年前，俄国的植物学家Tswett创立了色谱法。由Tswett创立的色谱法分离效率低，分离时间长，根据样品的不同，一般分离需要几小时至几天。◆20世纪40

2、年代至50年代初，先后出现了纸色谱（paperchromatography,PC）和薄膜色谱法(thin-layerchromatography,TLC)。特点：较经典色谱法简单、分离时间短，样品量要求小。◆1952年，James和Martin提出了气相色谱法（gaschromatography,GC)特点：以气体作为流动相。应用范围广泛受到人们重视。但对不易气化和热不稳定性差的化合物难以分离。◆20世纪60年代后期由于新型色谱柱填料的，高压输液泵和高灵敏度的检测器的出现，发展出了高效液相色谱（Highperformanceliquidchromatography,H

3、PLC）。液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用一、液-固吸附色谱（一）分离原理（二）常用吸附剂（三）吸附剂和流动相的选择经典液相色谱（一）分离原理各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质1.硅胶2.氧化铝3.聚酰胺1.硅胶结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心特性：1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附

4、中心，不易洗脱2）吸水→失活→105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大→500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力适用：分析酸性或中性物质2.氧化铝碱性氧化铝pH9～10适于分析碱性、中性物质中性氧化铝pH＞7.5适于分析酸性碱性和中性物质酸性氧化铝pH4～5适于分析酸性、中性物质3.聚酰胺氢键作用氢键能力↑强，组分越后出柱（三）吸附剂和流动相的选择：依据被测组分、吸附剂和流动相的性质1.被测组分性质（极性大小）：烃＜--------＜羧酸，醇2.吸附剂的活性：吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强强极性物质——选择弱吸附剂弱极性物质——选择强

5、吸附剂3.流动相的极性：流动相极性↑大，对被测组分的洗脱能力↑大“相似相溶”原则：根据组分性质、吸附剂的活性，选择适当极性的流动相4.三者关系图示：组分吸附剂流动相极性活性小极性非(弱)极性活性大非极性或弱极性二、薄层色谱法（一）概述（二）定性参数（三）吸附剂的选择（四）展开剂的选择（五）薄层板的制备（六）定性与定量分析（一）概述1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法2．操作过程：铺板→活化→点样→展开→定位(定性)/洗脱(定量)3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻）4．特点：分析快速、灵敏、显色方便5．应用：药物杂质

6、检查、纯度测定L0L1L2（二）定性参数1.比移值Rf讨论Rf与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为1）K↑大，Rf↓小2）薄层板一定，对于极性组分展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱）展开剂极性↓小，Rf↓小（不容易洗脱）3）Rf范围：0

7、已知组分相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1（三）吸附剂的选择根据被测物极性和吸附剂的吸附能力被测物极性强——弱极性吸附剂被测物极性弱——强极性吸附剂（四）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相的选择）根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性（五）薄层板的制备硅胶G——自含粘和剂硅胶H——不含粘和剂，铺板时另加入CMC硅胶FH254——含荧光剂，254nm紫外光照发绿光硅胶FH365——含荧光剂，365nm紫外光照发光（六）定性与定量分析定性分析——日光，紫外光，显色定量分析——洗脱法，薄层扫描法三、纸色谱法将固定相放在