1熟悉高效液相色谱仪的基本结构和操作方法

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1、1.熟悉高效液相色谱仪的基本结构和操作方法。2.熟悉高效液相色谱的定量方法(内标法)。实验二十三HPLC法测定咖啡因的含量实验目的用十八烷基化学键合相作固定相,甲醇/水或乙醇/水作流动相,可使咖啡因与非那西丁完全分离,而且保留值相近。因此,以非那西丁作内标可进行咖啡因的定量测定。在样品中加入内标物质ms进样,样品中被测组分峰面积和内标峰面积为分别Ai和As,则样品中被测组分的百分含量为:Pi%=Aimsfi,sAsm×100%式中fi,s为被测组分对于内标物质的相对校正因子,可在标准品mi中加入内标物质ms进样,

2、得标准品峰面积Ai和内标峰面积As,然后按下式求得:fi,s=miAsmsAi对于正常峰,也可用峰高定量。实验原理仪器与试剂液相色谱仪(岛津2010),50uL微量注射器,ODSC18柱,重蒸水,色谱甲醇,氯仿,咖啡因样品(原料药),咖啡因标准品,非那西丁标准品。咖啡因含量测定取咖啡因试样25.0mg,加入10.0mg非那西丁,溶于氯仿,定容25.00ml。进样得色谱图1,记录峰面积。取咖啡因标准品25.0mg,加入10.0mg非那西丁,溶于氯仿,定容25.00ml。进样得色谱图2,记录峰面积。用纯物质的氯仿溶液

3、进样,以确定各组分的峰位。由色谱图2计算咖啡因相对于非那西丁的相对校正因子。由色谱图1按内标法求算咖啡因试样百分含量。实验步骤1.试述高效液相色谱内标法定量的优点。2.高效液相色谱法流动相选择依据是什么?思考题

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