细胞增殖及其调控(III)

《细胞增殖及其调控(III)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第十二章细胞增殖与调控1细胞增殖的意义◆单细胞生物细胞增殖导致生物个体数量的增加。◆多细胞生物由一个单细胞即受精卵分裂发育而来，细胞增殖是多细胞生物繁殖基础。◆成体生物仍然需要细胞增殖，主要取代衰老死亡的细胞，维持个体细胞数量的相对平衡和机体的正常功能。◆机体创伤愈合、组织再生、病理组织修复等，都要依赖细胞增殖。22001年诺贝尔生理学与医学奖:◆利兰·哈特韦尔发现了控制细胞周期的基因，其中一种被称为“START”的基因对控制各个细胞周期的最初阶段具有决定性的作用。◆保罗·纳西的贡献是发现了CDK。◆蒂莫西·亨特的贡献是发现

2、了调节CDK的功能物质CYCLIN.312.1cellcycles一、细胞周期细胞周期:是指连续分裂的细胞从一次有丝分裂结束后开始生长到下次有丝分裂终止所经历的全过程。在这一过程中,细胞的遗传物质进行复制并均等地分配给两个子细胞。图4Phasesofthecellcycle5可将高等动物的细胞分为三类：①周期中细胞：连续分裂细胞，如表皮生发层、部分骨髓细胞。②静止期细胞（又称为休眠细胞）：暂不分裂，但适当刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝、肾细胞等。③终末分化细胞：不再分裂，又称终端细胞，如神经、肌肉、

3、多形核细胞等。6二细胞周期中各时相及其主要事件◆G1期(Gap1phase)◆S期(synthesisphase)◆G2期(Gap2phase)◆M期7G1期◆开始合成细胞生长所需要的多种蛋白质、碳水化合物、脂等，同时染色质开始去凝集。8S期◆DNA复制与组蛋白合成同步，组成核小体串珠结构9G2期◆DNA复制完成，在G2期合成少量的蛋白质和RNA分子；细胞周期某些调控分子活化（CDK1）10M期◆M期即细胞分裂期，真核细胞的细胞分裂主要包括两种方式，即有丝分裂(mitosis)和减数分裂(meiosis)。遗传物质和细胞内

4、其它物质分配给子细胞。11主要检验点：G1/S检验点：DNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？细胞体积是否足够大？在芽殖酵母中称start点，在其它真核细胞中称限制点点(restrictionpoint，R点)。S/G2期检验点：DNA复制是否完成？G2/M检验点：DNA是否损伤？细胞体积是否足够大？中-后期检验点（纺锤体组装检验点）：检验纺锤体组装是否完整细胞周期检验点（checkpoint）12细胞周期的时间长短与物种/细胞类型有关。G1期持续时间差异较大，M期最短,约0.5～4.5小时。脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察

5、测定法（PLM）：用3HTDR对测定细胞脉冲标记、定时取材，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。三细胞周期时间的测定13方法简述：用3H—TdR标记细胞群体，洗脱3H—TdR后，不同时间取样做细胞放射性自显影，找出正处于有丝分裂的细胞，计算其中带标记的细胞占有丝分裂细胞的百分数。依标记分裂指数曲线升降过程，可推求出细胞周期各时相的时长。变化规律：最开始的有丝分裂指数为零，持续一段时间后开始出现标记有丝分裂的细胞，然后有丝分裂指数不断增加，经过一段时间达到峰值。峰值持续一段时间，然后逐步下降到零，有丝分裂指数为

6、零持续一段时间，再次出现标记有丝分裂的细胞，进入下一个细胞周期循环。14①待测细胞经3H-TDR标记后，所有S期细胞均被标记。②S期细胞经G2期才进入M期，所以一段时间内PLM=0。③开始出现标记M期细胞时，表示处于S期最后阶段的细胞，已渡过G2期，所以从PLM=0到出现PLM的时间间隔为TG2。④S期细胞逐渐进入M期，PLM上升，到达到最高点的时候说明来自处于S最后阶段的细胞，已完成M，进入G1期。所以从开始出现PLM到PLM达到最高点（≈100%）的时间间隔就是TM。测定方法15⑤当PLM开始下降时，表明处于S期最初阶段

7、的细胞也已进入M期，所以从出现PLM到PLM又开始下降的一段时间等于TS。⑥从PLM出现到下一次PLM出现的时间间隔就等于TC，根据TC=TG1+TS+TG2+TM即可求出的TG1长度。事实上由于一个细胞群体中TC和各时相不尽相同，第一个峰常达不到100%，以后的峰会发生衰减，PLM不一定会下降到零，所以实际测量时，常以（TS+1/2TM）-1/2TM的方式求出TS。16三、细胞同步化测定原理细胞周期各阶段的时间与PLM的关系17（一）自然同步化1、多核体：如：粘菌、疟原虫。2、水生动物的受精卵：如海胆、两栖类。3、增殖抑制

8、解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，同步分裂。四、细胞（周期）同步化181、选择同步化1）有丝分裂选择法优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害。缺点：获得的细胞数量较少（分裂细胞约占1%～2%）。2）细胞沉降分离法(密度梯度离心法)优点：省时，效率高，成本低。缺点：同