RNAiso Plus说明书

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1、CodeNo.9108/9109研究用RNAisoPlus（TotalRNA提取试剂）说明书v201211Da目录内容页码●制品说明1●制品内容1●保存1●RNA提取实验前的准备1●实验操作2●RNA提取操作流程图3●RNA纯度分析4●Troubleshooting4●参考文献5●相关产品5●制品说明本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取TotalRNA。样品在RNAisoPlus中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（鲜红色下层，含有蛋白质、多糖、脂肪

2、酸、细胞碎片和少量DNA），RNA分布在上清层中，收集上清层，注意不要收集中间层，经异丙醇沉淀便可以回收得到TotalRNA。使用RNAisoPlus，TotalRNA的提取过程可在1小时内完成。提取的TotalRNA纯度高，基本不含蛋白质及基因组DNA，可以直接用于Northern杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR*等各种分子生物学实验。*：如果用于RT-PCR实验，即使有少量的基因组DNA也会影响实验结果，因此，实验前应使用RecombinantDNaseI(RNase-free)（CodeN

3、o.2270A）进行处理。●制品内容RNAisoPlus（CodeNo.9108）*100mlRNAisoPlus（CodeNo.9109）*200ml*RNAisoPlus中含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进行处理。【试剂盒之外所需准备试剂】◆氯仿◆异丙醇◆75%乙醇（DEPC处理水配制）◆RNase-free水（制备方法：使用RNase-free的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC至终浓度0.1%（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。）●保存4℃。避光保存以

4、保持活性。●RNA提取实验前的准备1、尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。（1）用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12小时。（2）然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。2、使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。如果使用的试剂不能高温高压灭菌，请使用高压灭菌后的仪器盛装，无菌过滤后使用。3、请使用一次性塑料手套和口罩进行所有试剂配制和实验操作，以避免RNase污染。-1

5、-●实验操作1.RNAisoPlus的使用量情况如下：样品量RNAisoPlus使用量（ml）10cm2的贴壁培养细胞1-25×106~1×107的非贴壁培养细胞1100µl的白细胞250～100mg的组织样品（易提取RNA）150～100mg的组织样品（不易提取RNA，如肝、脾、2骨及软骨*1等）15～30mg的植物材料*2（多糖和多酚含量不高的）12~5×107的酵母细胞*31*1：从骨及软骨提取的RNA时，可选择High-SaltSolutionforPrecipitation(Plant)(Cod

6、eNo.9193)和RNAisoPlus配套使用*2：从含有大量多糖的植物样本提取时，可选择Fruit-mate®forRNAPurification(CodeNo.9192)和RNAisoPlus配套使用*3：从酵母中提取RNA时，可选择YeastProcessingReagent(fortotalRNApreparation)(CodeNo.9089)和RNAisoPlus配套使用2.实验样品的研磨和匀浆。A.贴壁培养细胞①倒出培养液，用1×PBS清洗一次。②每10cm2生长的培养细胞中加入1-2ml

7、的RNAisoPlus，轻微晃动，确保使裂解液均匀分布于细胞表面。NOTE：对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞。③将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。④室温（15-30℃）静置5分钟，然后从核蛋白中分离RNA。B.悬浮培养细胞①将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000g4℃离心2分钟，弃上清，注意不要破坏细胞沉淀。②向每5×106个细胞中加入lml的RNAisoPlus。③用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。④室温（15-30℃）静置5分钟，然

8、后从核蛋白中分离RNA。C.动物组织、植物材料样品①将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量）。可以向研钵中加入与样品匀浆量匹配的适量的RNAisoPlus。对于新鲜的组织样品，立即加入RNAisoPlus，充分匀浆。②将匀浆液转移至离心管中，室温（15-30℃）静置5分钟。③12,000g4℃离心5分钟。④小心