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1、试剂质量检验部——王贺血细胞的分类与计数血细胞的生成及分化血液涂片的制备1、每份样本制作3张血涂片。要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25mm×75mm，厚度为0.8～1.2mm。并有明确标记。如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。2、使用EDTA－K2抗凝血液样本时，应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前，样本应充分混匀。注意，样本不能冷藏。3、用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，以30º～45º角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推
2、片至玻片的另一端。4、在1小时内，用Romanowsky类型染液染色；或在1小时内，用无水甲醇（含水量﹤3%）固定后染色。推片技巧推片倾斜45°±1，推成血膜长度25～35mm，宽度18～20mm，血膜四周留有空隙区，血膜终尾离玻片终端至少10mm，血膜均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，迅速扇（摇）干，血膜具有头、体、尾不同厚薄区域。此外，涂片时，还要考虑患者的血液状态，如贫血程度、血液粘稠度、WBC或有核细胞多少等因素，调整推片技巧。血膜至玻片边缘约5mm血膜至玻片一端约为总长1/3血涂片头部，涂片厚血涂片体部的检查区域血涂片尾部，涂片太薄良好
3、血涂片的要求血膜至少长25mm，至玻片两侧边缘的距离至少为5mm。血膜边缘要比玻片边缘窄，且边缘光滑，适用于油镜检查。血细胞从厚区到薄区逐步均匀分布，末端呈方形或羽毛状。血膜末端无粒状、划线或裂隙。所有这些情况会使白细胞集中在这些区域内。在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。通常，随着保存时间的延长，抗凝血会造成白细胞形态的改变，如胞浆内形成空泡，核分解破裂等。应将抗凝血液保存时间的影响减小到最低限度。除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区域内破损白细胞量应<2％。无人为污染。瑞氏染色-姬姆萨（Wright’s-Giemsa’s） 混合染色瑞
4、氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒着色较清晰,色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。染色步骤先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖；稍等片刻再加姬姆萨染液2-3滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)；稍等1-2分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上
5、染色液形成表面张力而终止染色液加入；染色30-40分钟；分色：用自来水缓缓冲洗至少3分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。血涂片检查的方法和程序将血液充分混匀，尽早推成血片并染色。先用低倍或高倍镜观察。了解血片染色和细胞分布情况、有无血小板或红细胞聚集（成串、成堆），尾部有无大型、成堆异常细胞等；继续用油镜在涂片厚薄适中处浏览血片，仔细观察红细胞、白细胞及血小板的形态，并估计其数量。如果观察结果与仪器报告相符，不需进行任何补充试验，即可按仪器测定的结果发出报告。如为贫血或其他血液病患者，其红细胞数量及相关的指标（如MCV、MCH
6、、MCHC）红细胞体积分布宽度（RDW）、直方图或散点图出现异常，则着重观察红细胞的大小、形态、内涵物、着色性、大小一致性以及有无有核红细胞等。如有异常，应加以描述并报告。正常情况下，在血片厚薄适中区域（每个红细胞彼此相互接触但双不重叠），每个油镜视野，约有血小板8～15个；或每10～30个红细胞见到一个血小板。血细胞形态检查的临床意义正常人的血液及造血器官中，各种血细胞的数量有一定的正常范围，不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构特点。观察血细胞形态、数量及其比例的变化是诊断造血系统疾病最基本的检查方法。造血系统疾病，引起血细胞形态学
7、的量和质的改变。血细胞形态学检查为临床提供诊断依据。血细胞形态学检查应包括外周血和骨髓两部分。外周血细胞改变往往反映骨髓病变的重要信息，有利于诊断。外周血细胞的主要成分白细胞红细胞血小板白细胞计数WBC计数的正常范围：4.0~10.0×109/L;WBC正常限度以下:轻度减少(<4.0～3.0×109/L),中度减少(<3.0～2.0×109/L),极度减少(<2.0×109/L);WBC正常高限度以上:轻度增多(>10.0～20.0×109/L),中度增多(>20.0～40.0×109/L),明显增多(>40.0～80.0×109/L)极度
8、增多(>80.0×109/L)。白细胞分类正常成人白细胞分类范围：缩写百分比绝对值/109L中性粒细胞NETU50～70%2.0～7.0×109淋巴细胞LYM20～
