血清丙氨酸氨基转移酶谷

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1、实验十五血清丙氨酸氨基转移酶(谷－丙转氨酶)活性测定改良Reiman-frankel法（改良赖氏法）目的掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的原理并熟悉操作方法了解测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的临床意义相关理论氨基酸代谢体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平衡食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组织蛋白质降解产生的氨基酸混在一起，分布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用肝脏的脱氨基方式有:氧化脱氨基,氨基转换作用及联合脱氨基催化转氨基反应的酶称为转氨酶(transaminase)肝脏中含此种酶较为丰富谷氨酸-丙酮酸转

2、氨酶(简称谷-丙转氨酶GPT，ALT)谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷-草转氨酶GOT，AST)原理血清中谷丙转氨酶作用于丙氨酸及α-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2，4－二硝基苯肼反应，生成丙酮酸－2，4－二硝基苯腙丙酮酸－2，4－二硝基苯腙在酸性溶液中呈黄色，加碱后呈棕红色，与标准液进行比色，以计算酶活性单位。在一定的条件下，GPT越多，则反应速度越快，在一定的时间内产生的丙酮酸也就越多以丙酮酸的产量来代表GPT活性的大小丙酮酸的生成量与溶液颜色的深浅，即与GPT活性的高低成正比关系通过与标准液进行比色，以计算酶活性单位操作制作标准

3、曲线血清GPT活性测定0.10.1混匀，10分钟后将试管从恒温水浴中取出，冷却至室温。用520nm（或者505nm)波长进行比色，以空白管校正光密度到零点，读取各管光密度，将各测定管OD值(A值）与其对应的酶活性单位数作图，连接各点成平滑曲线，即成标准曲线。其中以A为Y轴，丙酮酸含量（或者相应酶单位）为X轴测定0.5混匀，10分钟后将试管从水浴中取出，冷却至室温。用520nm波长进行比色，以空白管校正到零点，读取试剂及测定管光密度。用测定管光密度查标准曲线，取得血清标本的丙酮酸含量或者酶单位数。正常值<0.58mmol/L或者0-25单位校正

4、以空白管校正光密度到零点，读取各管光密度，将各测定管OD值与其对应的酶活性单位数作图，连接各点成平滑曲线，即成标准曲线。以空白管校正光密度到零点，读取各管光密度。查标准曲线，取得血清标本的酶单位数。临床意义人血清GPT的正常值为0-25卡门氏单位GPT在肝细胞内活性最高，比血清高100倍，当有1％的肝细胞坏死时，可使血清内酶活性升高1倍。GPT是肝细胞受损最敏感的指标之一肝炎病毒性肝炎的潜伏期、急性发病期，以及隐性感染者均可有血清谷丙转氨酶升高，且往往是谷丙转氨酶单项升高其他疾病药物性肝炎、脂肪肝、各种内外毒素所致肝损、肝内胆汁淤积胆道梗阻、

5、胰腺疾病、甲状腺功能亢进症、急性心肌梗塞、心力衰竭、多发性肌炎、休克等往往伴有各种疾病的临床症状和实验室检查异常，很少是血清谷丙转氨酶单项升高空白管标准管样品管基质液（ul）250250250标准液（ul）－50－血清（ul）－－50蒸馏水（ul）50－－混合均匀后，37℃水浴，30分钟，然后各加显色剂250ul。继续水浴20分钟，取出，各管加稀释的2.5ml。室温放置3分钟后，510nm比色。