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1、荧光分光光度计的应用一、荧光分光光度计荧光分光光度计既可用于定量分析，也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。第一单色器选择激发光波长（＞250nm的紫外光），故称为激发单色器。第二单色器（荧光单色器）与激发光入射方向垂直，并选择荧光波长，可提高方法的选择性和准确度。荧光分光光度法直接测定天然水中的酚实验部分1.仪器和主要试剂日立F一3000荧光分光光度计、标准酚溶液、0.200mol/LKH2PO4—0.275mol/LKHPO4缓冲溶液、饱和Na2C2O4溶液.2.实验方法3.结果与讨论3.2Na2C2
2、O4的用量天然水中含Ca2+，Mg2+较多，特别是海水，加入缓冲溶液会出现白色浑浊，使回收率偏低，加入1-2滴Na2C2O4可消除浑浊.（见表1）3.4荧光强度的稳定性取酚标准溶液及空白溶液，依实验方法进行荧光强度稳定性试验。测定了2.5小时内荧光强度变化情况，发现荧光强度在1小时内基本不变。3.5样品分析用流动注射在线富集分离荧光分光光度计测定垃圾渗出液中的苯胺实验部分1.1仪器和主要试剂（1）流动注射仪,自装配,附具有富集作用的自填装微型柱;荧光分光光度计RF-540(日本岛津公司),附有自行研
3、制的流通管;721可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)。（2）苯胺标准贮备液(10g/L):称取2.500g新蒸馏的无色分析纯苯胺,用25mL的1moL/L盐酸溶解后,移至250mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,置于冰箱中保存。（3）苯胺工作溶液(10mg/L):用移液管移取1.0mL的10g/L苯胺标准贮备液于1000mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,使用时配制。盐酸溶液(0.5mol/L);NH3H20-NH4Cl缓冲溶液(pH=10)。1.2实验方法流动注射仪附填装有阳离子型大孔吸附树脂的微
4、型柱,流动注射分析过程由时序电路控制,分为再生、进样、冲洗、洗脱4步,图1是流动注射分析的流程图,旋转阀有2个工作状态,图中所示为A状态,箭头所示为B状态。各步的阀位置为:再生V1(A)、V2(A),进样V1(B)、V2(A),冲洗V1(A)、V2(A),洗脱V1(B)、V2(B)。首先用盐酸溶液再生树脂;然后进样,在pH<3的条件下,苯胺主要以C6H5NH3+正离子形态存在,被树脂吸附;然后快速冲洗掉树脂颗粒间的残留样品;最后进行洗脱,在pH=10的条件下,苯胺主要以C6H5NH2分子形态存在,吸
5、附的C6H5NH3+转变为C6H5NH2后被洗脱至荧光分光光度计内的流通管中,用时间扫描动态检测洗脱液荧光强度。1.3结果与讨论3.1工作曲线用移液管分别取0.0、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL10.0mg/L的苯胺标准溶液于一组100mL容量瓶中,定容后配制成含苯胺分别为0.00、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60mg/L的标准溶液,按上述实验条件动态检测荧光强度,
6、绘制荧光强度和质量浓度的工作曲线为:F=48.9C+15.2,r=0.9999。线性范围为0.07~0.50mg/L。3.2干扰在上述实验条件下研究了3mg/L的苯酚、联苯胺、2,4-二硝基苯胺、对氨基苯甲酸、二苯胺等对0.30mg/L的苯胺的干扰情况。结果表明:(1)酚类物质、联苯胺、2,4-二硝基苯胺、二苯胺等胺类物质不干扰苯胺的测定,这主要是因为它们不能以正离子的形态被树脂吸附;(2)对氨基苯甲酸等也不干扰苯胺的测定。3.3水样的测定及显著性检验将此法应用于垃圾渗出液的测定。取垃圾渗出液蒸馏,
7、得到1L蒸馏液,然后用本法直接进样分析,结果见表1。表1同时给出了对蒸馏液进行萃取后用HPLC测定的结果及t检验的结果。可以看出,在95%的置信水平下,两种方法没有显著性差异,结果令人满意。2.4回收率实验取1L垃圾渗出液蒸馏,向蒸馏液中分别加入含苯胺0.100、0.200mg的标准溶液,然后用蒸馏水稀释至2L后直接进样分析,结果见表1。可以看出,本法的回收率在96%~104%之间。图2b、c是垃圾渗出液的加标回收荧光光谱。2.5流动注射-荧光分光光度计联用的检测性能荧光分光光度计法测定腊肉中维生素
8、C1实验部分1.1仪器与试剂荧光分光光度计［F－7000(日立公司)］；DHG－9241A恒温培养箱；抗坏血酸、偏磷酸、乙酸钠、硫脲、硼酸;2，6二氯靛酚、盐酸邻苯二胺。1.2实验方法1.2.1样品前处理精确称取匀浆后的腊肉2～5g置于烧杯中，加入20mL50g/l偏磷酸，超声20min后，过滤至100mL棕色容量瓶中，用50g/L偏磷酸定容吸取滤液1.00mL于试管中,加入0.1ml2g/l二氯靛酚(使VC氧化成脱氢VC)，混匀(此时溶液呈微红色)再加入0.10ml
