技术部新入职员工考核试卷

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1、技术部新入职员工培训考核试卷（开卷）姓名考试时间成绩一、填空题（每题1分，共40分）1、实时荧光定量PCR（Real-TimePCR）是2、PCR一般包括、、三个阶段。3、基线是4、阈值是5、Ct值是6、荧光PCR实验室一般分为、、三个区。7、稀释样本时，先加、后加，吹打均匀后再依次从上一个浓度稀释到下一个浓度。A.水B.灭菌的超纯水C.样本D.质粒8、荧光PCR上机时，切不可用记号笔在标记，已标记的应在放入仪器前擦拭干净，并在仪器相应的孔上对样本信息进行记录。上机后，预计实验结束的时间，等实验结束应及时关机，并清理仪器里，用

2、一次性手套封好，切忌在实验室内，避免气溶胶污染。9、配制PCR反应液时，避免PCR管盖或8连管盖，其一般为光学平盖或光学膜，被污染极可能导致结果异常而影响判断。10、禁止携带、、等阳性样本进入配液室。11、使用、液体，或是使用材料时，必须在生物安全柜或通风橱内进行。12、荧光PCR试剂盒一般包括三个组分。13、进行荧光PCR实验过程中要注意以下细节：1）实验过程中实验员要穿、戴、戴；2）用枪要，取液加液不能过快；3）样本标记要清晰，离心管要；4）抽提核酸的废弃耗材要用消毒水浸泡处理，装有消毒水的废液缸快满时要及时处理，并加适量

3、的于废液缸内，实验完成后要及时清理桌面。14、荧光PCR实验室污染考虑有以下几个方面，分别为、、、等造成的污染。15、目前real-timeQ-PCR所使用的荧光化学方法主要有、、、、。二、简答题1、以TaqMan荧光探针为基础的实时荧光PCR技术，目前在国内临床诊断中应用最为广泛，TaqMan荧光探针检测原理。下图为据回答问题：（30分）（1）此图R表示的是，Q表示的是（2）图中以DNA是以为模板，在PCR_阶段形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的基因。（3）实时检测PCR在扩增过程中可分为、、、四

4、个阶段。（4）普通PCR是在PCR结束后对_进行定量分析，实时检测PCR扩增，在扩增的指数期对_进行定量。（5）和普通PCR相比，荧光PCR有哪些优势？（10）2、1979年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内表达成功。请根据图回答问题：胰腺反转录酶质粒②⑤③①DNA大肠杆菌原胰岛素信使RNA③④（15分）（1）此图表示的是采取从中获取目的基因的过程。（2）图中①DNA是以为模板，_形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的基因。（3）图中②代表的是，在它的

5、作用下将质粒（DNA）切出_末端。（4）图中③代表____DNA，含目的基因。（5）图中④表示。⑤表示____DNA随大肠杆菌的繁殖而进行___。三．论述题1.、试述PCR技术的基本原理，如果想通过PCR技术从一个生物基因组中扩增一个约500bp的基因片段，再和载体连接克隆，然后转入大肠杆菌中，请描述其克隆过程（包括检测）。（15分）