实验室的标准操作规程S

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1、实验室的标准操作规程（SOP）水产品和畜、禽肉中氯霉素残留量检验方法气相色谱法-质谱检测法1方法提要根据方法进行验证修改后,并依据欧盟指令建立了质谱测定条件，将某些关键步骤进行细化。本方法适用于水产品和畜、禽肉组织、肠衣中氯霉素残留确证检测。用乙酸乙酯提取，提取液用正己烷净化，硅烷化后用气相色谱配有负化学源的5973N质谱检测器检测。实验室的标准操作规程（SOP）气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素2实验室设备2.1仪器和设备2.1.1Agilent6890气相色谱仪：配有负化学源的5973N质谱检测器。2.1.2离心机：5810型，Eppendorf公司。2.1.3均质器：T25

2、型，18G刀，IKA公司2.1.4旋转蒸发器：R-200，BUCHI公司。2.1.5移液枪：200μL、1000μL、5000μL，Eppendorf公司。2.1.6具塞塑料离心管：15mL、50ML。2.1.7涡流混匀器：39760型，Thermolyne公司。实验室的标准操作规程（SOP）气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素2.2试剂所有试剂均为分析纯级（有机试剂需重蒸馏），水为去离子水。2.2.1乙酸乙酯。2.2.2甲醇。2.2.3正己烷。2.2.4氯化钠。2.2.5无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用。2.2.6硅烷化试剂：SylonBFT{99%N,O-双（三

3、甲基硅烷）三氟乙酰胺（BSTFA）+1%三甲基氯硅烷（TMCS）{美国Supelco产品，货号33154-u，0.1mL/ampul}。实验室的标准操作规程（SOP）气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素2.3标准物质2.3.1氯霉素（chloramphenicol）：纯度≥99%，Amresco分装，上海生工生物工程有限公司和Sigma公司。2.4标准溶液的配制2.4.1标准储备液的配制准确称取氯霉素标样50mg置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，混匀，浓度为1mg/mL，4℃保存6个月。2.4.2标准工作溶液配制：取1mL储备液用甲醇溶解定容到100Ml，此时浓度为

4、1μg/mL，取1μg/mL1mL定容至10mL，浓度为0.1μg/mL；取1μg/mL0.5mL定容至10mL，浓度为0.05μg/mL。实验室的标准操作规程（SOP）气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3实验方法3.1试样制备从所取原始样品中取出部分有代表性样品，经充分混匀。用四分法缩分出不少于500g试样，混匀，均分成两份。装入清洁容器内，加封后，表明标记。3.2测定步骤3.2.1提取与净化称取5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中。加入25mL乙酸乙酯，用均质器均质提取2min，4000r/min离心3min。将乙酸乙酯层移入50mL鸡心瓶中，试样再加入5mL乙酸乙

5、酯，涡流混匀器混匀1min，合并乙酸乙酯提取液，于40℃旋转蒸发至近干。加入1mL甲醇溶解残渣，再加入20mL4%氯化钠溶液和15mL正己烷，用涡流混匀器混合1min，4000r/min离心3min。弃去正己烷层，水层加15mL正己烷，同上操作，弃去正己烷层。水层中加入15mL乙酸乙酯，用涡流混匀器混合2min，3000r/min离心3min。吸取乙酸乙酯层，通过无水硫酸钠柱（5g）脱水于另一个50mL鸡心瓶中，用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱。于40℃旋转蒸发至约1mL。实验室的标准操作规程（SOP）气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3.2.2衍生化将浓缩液移入5mL离心管中，用

6、1mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶，合并乙酸乙酯。于40℃吹氮气蒸发至干。加入100µL正己烷和100µL硅烷化试剂，于70℃烘箱中加热30min。吹氮气蒸发至干，加入0.50mL正己烷与环己烷混合液（6：4），混匀溶解，供气相色谱测定。3.2.3测定3.2.3.1气相色谱条件a)色谱柱：30m×0.25mm×0.25µm，HP-5MS；c)PTV进样口温度：70℃(1.0min)700℃/min250℃(6.0min)700℃/min300℃；d)载气：氦气，恒压模式，柱头压10psi；e)进样量：2uL实验室的标准操作规程（SOP）气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3.2.3.2质谱条

7、件a)传输线温度：280Cb)溶剂延迟：5minc)离子源温度：150Cd)四极杆温度：100Ce)反应气：甲烷，流量：2ml/minf)选择离子监测目标物监测离子氯霉素466，468，470，376其中定量离子为466，定性离子为468，470，376g)离子停留时间：60毫秒实验室的标准操作规程（SOP）气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3.2.3.3标准溶液的衍生化取适量标准溶液，用氮气吹干，加入200µL正己烷和100µL硅烷化试剂，于80℃烘箱中加热30min。吹氮气蒸发至干，