实验二细菌单染与复染

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1、实验二细菌简单染色法革兰氏染色法一、目的要求1．巩固油镜的使用方法；2．学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌的简单染色法；3．学习、掌握细菌的革兰氏染色法；4．建立“无菌操作”的概念，学习其技术。二、实验原理简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染色的方法，常用碱性染料。只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。革兰氏染色丹麦

2、C.Gram创立，用于细菌分类学研究细菌细胞壁的结构G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。三、实验材料变形杆菌、表皮葡萄球菌载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。革兰氏染色液一套四、实验步骤1．简单染色载玻片——中心加半滴水——无菌操作取菌——涂布于水中使均匀并成薄膜状——干燥——火焰

3、固定——染色（1~2min）——水洗——干燥——镜检2.革兰氏（Gram）染色涂片——干燥——固定——结晶紫初染（1~2min）——水洗——碘液媒染1min——水洗——95%酒精脱色（约20－30秒）——立即水洗——番红复染约2分钟——水洗——干燥——镜检（混合涂片染色）Left:单菌染色结果(G+或G-)Right:混合菌染色结果(G+和G-)细菌细胞结构革兰氏染色结果及细菌分类革兰氏染色阴性五、实验结果文字记录所观察到的革兰氏染色结果的差别，判断是G－/G＋。绘图描述各菌形态（可在一个视野中）。六、问题

4、与讨论1革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚？实验关键步骤？2对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确证你的结论正确？