GBT18932.27-2005 蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法 酶联免疫法.pdf

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1、ICS67.180.10一一‘引通E3中华人民共和国国家标准GB/T18932.27-2005蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法Methodforthedeterminationoftylosinresidueinhoney-Enzyme-linkedimmunosorbentassaymethod2005-02-04发布2005-08-01实施率督黔臀瓣瞥蓬臀臀暴发“.www.bzxzk.com.GB/T18932.27-2005月U青GB/T18932本部分的附录A为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。本部分由中华全国供

2、销合作总社归口。本部分起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本部分主要起草人：庞国芳、付宝莲、张进杰、肖艳霞。本部分系首次发布的国家标准。.www.bzxzk.com.GB/T18932.27-2005蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法飞范围GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中泰乐菌素残留量酶联免疫测定方法。本部分适用于蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定。本部分的方法检出限：泰乐菌素为10.0tg/kg}2规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内

3、容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重现性和再现性(GB/T6379-1986，neqISO5725：1981）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992,neqISO3696:1987)3原理试样中残留的泰乐菌素与试剂盒中的泰乐菌素酶标记物共同竞争泰乐菌素抗体，形成的酶标记抗原抗体复合物与显色剂发生反应，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中泰乐

4、菌素的含量。4试剂和材料4.1泰乐菌素试剂盒：4.1.196孔板：12条X8孔。4.1.2泰乐菌素标准溶液。4.1.3标准和样品缓冲溶液：浓缩液。4.1.4泰乐菌素酶标记物。4.1.5酶标记物缓冲溶液。4.1.6洗板溶液：浓缩液。4.1.7显色剂。4.1.8反应停止液。4.2缓冲溶液：将标准和样品缓冲溶液（(4.1.3)按泰乐菌素试剂盒（(4.1)中规定的比例用水稀释，混匀后备用。4.3泰乐菌素标准工作溶液：根据泰乐菌素试剂盒的线性范围，用稀释的缓冲溶液（4.2)将泰乐菌素标准溶液（(4.1.2)稀释成不同浓度（tig/L)的标准工作溶液。每次测定均应现

5、配现用。4.4泰乐菌素酶标记物溶液：根据泰乐菌素试剂盒中说明，用酶标记物缓冲溶液（4.1.5)将泰乐菌素酶标记物（4.1.4)溶解，混匀后备用。4.5洗板工作溶液：将洗板溶液（(4.1.6)按泰乐菌素试剂盒中规定的比例用水稀释，混匀后备用。4.6水：GB/T6682规定的一级水。.www.bzxzk.com.GB/T18932.27-20055仪器5.1酶标仪。5.28道移液器：50l.L^-300pLo5.3单道移液器：5l.L-50liL,100liL-1000pL和2mL-10mLo5.4液体混匀器。5.5离心机。5.6注射过滤器：2mL，并带有孔

6、径为0.45Jim的水相针头式过滤膜。5.7具塞试管：10mL,20mL.6试样的制备与保存6.1试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的实验室样品，在密闭的情况下，置于不超过60'C的水浴中温热、振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并加以标识。6.2试样的保存将样品于室温下保存。7分析步骤7.1提取称取1g试样，精确到0.01g，置于20mL具塞试管中，加人9mL缓冲溶液（(4.2)于液体混匀器上快速混匀1min，使试样完全溶解，以3000r/min离心10min后，取适量的样

7、品上清溶液用注射过滤器过滤至10mL的具塞试管中，供酶标仪测定。此溶液稀释系数为10,7.2测定条件以下所有操作应在20'C-24℃室温下进行。7.2.1酶标仪测定条件：酶标仪测定波长为450run.7.2.2人工洗板条件：洗涤次数五次以上，每次注水量为250pL,7.2.3泰乐菌素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(200C-240C）后方可使用。7.2.4将测定需用的微孔板（(4.1.1)备齐并插人微孔架上，记录标准及样品等在微孔架上的位置（模板图）。7.3测定测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。7.3.1分别吸取50ILL泰乐菌素标准工作

8、溶液（(4.3)和样品溶液等，按模板图位置依次加人各自的微孔底部。7.3.2分别