资源描述：
《GBT17480-1998 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T17480-1998前言酶联免疫吸附(ELISA)法测定黄曲霉毒素B,(AFB,)，是近20年来发展起来的一种新的分析方法。它比原GB8381-87薄层荧光限量法(半定量)测定AFB，具有技术先进、灵敏度高、特异性强、精确度高、重复性好、测定速度快、成本低、污染少等优点。其原理是通过AFB,抗体与酶标AFB,抗原和待测抗原之间免疫竟争反应以及酶的催化显色反应相结合来检测样品中AFB，的含量。国外已研制成专门的测试盒供检测部门使用，如美国Agri-Screen等公司就有这种产品。本标准等效采用AOAC(美国公职分析化学家协会)中关于棉籽制品和混合饲料中AFB,
2、酶联免疫吸附筛选法，该法1989年首次在AOAC上获得通过。本标准为饲料中AFB，限量和定量测定法.可与原GB8381-87标准并列使用，而以原标准为仲裁法。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由江苏省微生物研究所、上海市饲料质量监督检验站、国家饲料质量监督检验中心(北京)、上海市嘉定纤检仪器厂共同组成的起草工作组负责起草。本标准主要起草人:成恒篙,潘中华、张瑜、陈必芳、必晓黎、赵晓联、袁建兴、杨众、徐燕芳、葛其德。.www.bzxzk.com.中华人民共和国国家标准饲料中黄曲霉毒素Bl的测定酶联免疫吸附法GB/
3、T17480-1998DeterminationofaflatoxinB,in-Enzyme-linkedimmunosorbent1范围本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B,(AFB,)的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。本标准适用于各种饲料原料、配(混)合饲料中AFB:的测定。2引用标准GB8381-87饲料中黄曲霉毒素B，的测定方法3原理利用固相酶联免疫吸附原理，将AFB,特异性抗体包被于聚苯乙烯微量反应板的孔穴中，再加入样品提取液(未知抗原)及酶标AFB，抗原(已知抗原)，使两者与抗体之间进行免疫竞争反应，然后加酶底物显色，颜色的深浅取决于抗体和酶标AFB,抗原
4、结合的量，即样品中AFB,多，则被抗体结合酶标AFB,抗原少，颜色浅，反之则深。用目测法或仪器法与AFB，标样比较来判断样品中AFB,的含量。4试荆和材料4.1AFB,酶联免疫测试盒组成4.1.1包被抗体的聚苯乙烯微量反应板:24孔或48孔。4.1.2A试剂:稀释液，甲醉:蒸馏水为7:93(V/V).4.1.3B试剂:AFB，标准物质(Sigma公司，纯度1000)溶液，1.00pg/Lo4.1.4C试剂:酶标AFB，抗原(AFB,辣根过氧化物酶交联物，AFB,-HRP),AFB,:HRP摩尔比)<2:1,4.1.5D试剂:酶标AFB，抗原稀释液，含0.1%牛血清白
5、蛋白(BSA)的pH7.5磷酸盐缓冲液(PBS),pH7.5磷酸盐缓冲液的配制:称取3.01g磷酸氢二钠(Na,HPO,"1214i0),0.25g磷酸二氢钠(NaH,PO,·2H,O),8.76g氯化钠(NaCI)加水溶解至1L,4.1.6E试剂:洗涤母液，含0.05%吐温-20的PBS溶液。4.1.7F试剂:底物液a，四甲基联苯胺(TMB)，用pH5.0乙酸钠一柠檬酸缓冲液配成浓度为。.2-g/LpH5.0乙酸钠一柠檬酸缓冲液配制:称取15.09g乙酸钠(CH,COONa·3H,0),1.56g柠檬酸(C,H,O,·H2O)加水溶解至114.1.8G试剂:底物液
6、b,ImLpH5.0乙酸钠一柠檬酸缓冲液中加人。3%过氧化氢溶液281,1。4.1.9H试剂:终止液，c(H2S0,)二2mol/L硫酸溶液。国家质1t技术监督局1998一08一28批准199，一01一01实施.www.bzxzk.com.GB/T17480-19984.1.101试剂:AFB、标准物质(Sigma公司，纯度100%)溶液，50.00pg/14.2测试盒中试剂的配制4.2门C试剂中加入1.5mLD试剂，溶解，混匀，配成试验用酶标AFB，抗原溶液，冰箱中保存。4.2.2E试剂中加300mL蒸馏水配成试验用洗涤液。4.3甲醇水溶液:甲醉:水为5:5(V/
7、V),5仪器、设备5.1小型粉碎机。分样筛:内孔径0.995mm(20目)。:一;分析天平:感量。·01g,反月J﹃…滤纸:快速定性滤纸，直径9^10cm,Jk‘JJ微量连续可调取液器及配套吸头:10^-100pL,哎户0口培养箱,(0^500C)士I'C，可调。反，1J阿冰箱:4^-80C,l卜六目︺户目AFB,测定仪或酶标测定仪，含有波长450nm的滤光片。6分析步骏6.1取样按GB8381-87中5.1要求采集、处理样品，制成分析用的试样。如果样品脂肪含量超过10%,粉碎前应用乙醚脱脂，再制成分析用试祥，但分析结果以未脱脂计算。6.2试样提取称取5g试样，
