大学研究生课程-色谱概论-研究生

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1、1色谱分析-----研究生2第一章色谱分析法概论第一节色谱法概述一、什么是色谱法色谱分析法简称色谱法(chromatography)，是一种物理或物理化学分离分析方法。3图示固定相——CaCO3颗粒流动相——石油醚色带4第二节色谱法的分类与历史一、色谱法的历史1.新型固定相和检测器的研制2.色谱新方法的研究3.色谱联用技术4.色谱专家系统5二、分类：1．按两相分子的聚集状态分：流动相固定相类型液相色谱液体固体液-固色谱液体液体液-液色谱气体固体气-固色谱气体液体气-液色谱气相色谱6续前2．按操作方式分：平面色谱纸色谱薄层色谱高分子薄膜色谱柱色谱填充柱色谱毛细管柱色

2、谱73．按分离机制分：分配色谱法吸附色谱法离子交换色谱法空间排阻色谱法亲合色谱法化学键合相色普法毛细管电色谱法毛细管电泳法8图示色谱法简单分类9第二章色谱基本理论定性参数定量参数柱效参数分离参数相平衡参数第一节色谱参数10续前（一）色谱流出曲线和色谱峰1．色谱流出曲线是由检测器输出的电信号强度对时间作图所绘制的曲线，又称为色谱图。2．基线是在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线。一、色谱流出曲线和有关概念11123．色谱峰是流出曲线上的突起部分。正常色谱峰为对称形正态分布曲线。不正常色谱峰有两种：拖尾峰和前延峰。色谱峰的对称与否可用对称因子fs(symmetryf

3、actor)，或叫拖尾因子(tailingfactor)，来衡量。13对称因子在0.95～1.05之间的色谱峰为对称峰；小于0.95者为前延峰。大于1.05者为拖尾峰。1415二、定性参数（一）保留值1．保留时间(retentiontime；tR)是从进样到某组分在柱后出现浓度极大时的时间间隔，即从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔。2．死时间(deadtime；t0)是分配系数为零的组分，即不被固定相吸附或溶解的组分的保留时间。16173．调整保留时间(adjustedretentiontime；)4．保留体积(retentionvolume；VR)是从进

4、样开始到某个组分在柱后出现浓度极大时，所需通过色谱柱的流动相体积。185．死体积(deadvolume；V0)196．调整保留体积(adjustedretentionvolume；)与流动相流速无关7．相对保留值(relativeretention；r)208．保留指数(retentionindex；I)又称Kovats指数，定义式如下：Ix-----待测组分的保留指数z与z+n---正构烷烃对的碳原子数n可为1、2…，通常为1。21规定正己烷、正庚烷、正辛烷的保留指数分别为600、700、800，依次类推。同系物中，每增加1个CH2，保留指数增加100。例如在阿

5、皮松柱上，测定某样品的保留指数，测得数据如下：22tRt0样品乙酸正丁酯340s30s物质对正庚烷(Z)204s正辛烷(Z+n)403.4s说明乙酸正丁酯的保留行为，相当于7.756个碳的正构烷烃的保留行为。23三、柱效参数（一）色谱峰区域宽度1．标准差(standarddeviation；σ)是正态色谱流出曲线上两拐点间距离之半。σ越大，组分越分散；反之越集中。24252．半峰宽(peakwidthathalfheight；W1/2)是峰高一半处的峰宽。W1/2=2.355σ3．峰宽(peakwidth；W)是通过色谱峰两侧拐点作切线在基线上所截得的距离。W=4

6、σ或W=1.699W1/226（二）理论塔板数和理论塔板高度1.理论塔板数27282.理论塔板高度29四、分离参数若R=1，4σ分离，两峰基本分开。若R=1.5，6σ分离，两峰完全分开(基线分离)。302.基本分离方程式（1）柱色谱31a项取决于柱效，n↑，a项↑b、c项相关在GC中：b项主要受色谱柱性质影响c项主要受柱温影响在HPLC中：b项主要取决于流动相的种类c项主要取决于流动相的配比32（2）薄层色谱：讨论：①a项为薄层板板效项。N↑，斑点越集中，R↑。②b项为选择项。选择合适的流动相，提高α。③c项为容量项。Rf2↑，R↓。最佳分离条件：Rf值在0.3~

7、0.5。调整展开剂极性，使Rf值落入最佳范围。33（二）有效峰数（effectivepeaknumber,ENP)ENP的含义：在含有Z与Z+1个碳的正构同系物的色谱峰间能容纳的色谱峰数。ENP越大，色谱柱的分离性能越好。34例如：在一个20m0.24mm内径的WCOT柱，固定液为Carbowax20M，柱温80℃，测定正构醇同系物得：正戊醇、正己醇和正庚醇的保留时间分别为：554.0，870.6和1459.2s，色谱峰宽分别为：7.54，12.03和20.40s。用正戊醇、正己醇的数据计算ENP35（三）分离值1.分离值在柱色谱中的定义和含义36例1若RZ+1/

8、Z=6，R