目标蛋白质快速分离系统

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1、目标蛋白质快速分离系统(PF2D)蛋白质组学(Proteomics)研究特定组织/细胞/生物系统中全部蛋白质的结构和功能及其相互关系发现/寻找新的目标蛋白/诊断标记物/药物/靶标如何找出有差异的蛋白质?蛋白质组学与寻找目标蛋白的工作流程:蛋白质组学的一个整体解决方案ProteomeLabStrategy寻找目标材料（组织、细胞、细胞器）(确认目标蛋白的所在位置)↓Altra/XL流式细胞仪/细胞计数/活度测定仪Cellomics全自动荧光显微分析系统/A2芯片系统组织、细胞、细胞器等的分级分离↓细胞/亚细胞/细胞器的分级分离/AllegraTT/Av

2、antiJ高效离心机/Optima超速离心机/淘洗离心机/Biomek全自动液体加样器目标蛋白的快速分离↓ProteomeLabPF-2D目标蛋白快速分离系统目标蛋白的快速鉴定ProteomeLabPA800目标蛋白快速鉴定系统/质谱联用系统/P/ACEMDQ毛细管电泳系统/DU800核酸/蛋白分析仪/XL-A蛋白质液体相互作用分析系/↓Biomek蛋白质自动结晶工作站目标蛋白的评价A2蛋白芯片系统/Access免疫化学发光分析↓系统/软件解决方案/生物信息学疾病的诊断Access全自动免疫分析系统/诊断蛋白芯片Altra/XL流式细胞仪各种快速诊断

3、试剂盒和试纸条蛋白质组分离技术凝胶电泳分离技术色谱分离技术:二维色谱技术/多维色谱技术毛细管电泳分离技术其它分离技术(离心等)革命性的ProteomeLabTMPF-2D目标蛋白快速分离系统1stD+2ndD系统----综合型ProteomeLabPF-2DProteinfractionationsystem2001年美国具有重大商业应用价值的100项创新的R&D技术之一(技术介绍在GeneticEngineeringNews)ProteomeLabTMPF2DUVDetectorpHMonitorUVDetectorPA800MALDI/TOF1s

4、tDimensionChromatofocusingFractionCollector/Injector2ndDimensionReversePhaseESI/MSInjector创新的配套试剂盒色谱聚焦柱(25x0.2cm)1.5um无孔硅胶（NPS）反相疏水分离柱(3.3x0.46cm)色谱聚焦起始缓冲液(pH8.5)色谱聚焦洗脱缓冲液(pH4.0)PD-10缓冲液交换柱技术创新点创新的思路:等电点和疏水性分离的结合/同时又是一个开放平台/也可进行多维分离色谱聚焦分离柱、反向分离柱的技术改进独有的软件系统/最佳的重现性，实现蛋白质差异显示技术和差

5、异蛋白质回收技术实现仪器一体化控制平台/还可与毛细管电泳和目标蛋白快速鉴定系统共享控制系统蛋白质组学的创新技术:成像软件技术将光电倍增管采集的UV信号转换成图象信号,进行蛋白质组的差异显示肝细胞培养细胞系蛋白质组的UV/pI二维谱图UVChromatogramforpI=7.6-7.9(Lane19)Fraction#DrugEfficacy(Dosage/Time)StudiesusingaColonCancerCellLine123412341234****PartialUV/pIMapofColonCancerCellLineBeforean

6、dAfterDosageTreatment.ComparativeMapsProducedUsingDeltaVueSoftwareuntreatedTreatedwithdrugdifference传统的2D凝胶电泳技术proteolysiselutionpeptidesMassSpectrometry传统2D凝胶电泳的优点方法发展早近年中在方法标准化/凝胶条供应有比较大的发展,为许多实验室和科学家所采用,有许多经验国际上有网站/数据库可供比较,在早期蛋白质的研究和蛋白质组的工作中发挥了不少作用传统2D凝胶电泳的挑战和问题对低丰度蛋白质的检测来说灵

7、敏度不够是劳动密集性的工作/费力和费时的操作程序不同实验间蛋白质所在位置的漂移不能全面代表膜蛋白或疏水蛋白的真实情况某些蛋白质在等电聚焦缓冲液中低溶解度蛋白质间着色的差异引致定量的误差碱性蛋白检测难特大分子量的蛋白质的检测难特小分子量的蛋白质的检测难蛋白质从1D电转移到2D凝胶过程中的损失某些蛋白质带电荷的不均一性易受污染要求在变性的条件下进行关键的优势高上样量是毫克级别(可达5-10mg),加上高回收率,特别有利于低丰度蛋白质的分离获得的蛋白质完整性好,保存功能,且在溶液中,易于后续操作,获得了目标蛋白质进入后续研究总的分辨率高、速度快/简单自动化

8、目标蛋白快速分离系统特点灵敏度高，有利于低丰度蛋白质的检测容易自动化，也可直接与质谱(MS/MS)连接分辨率