陈焕程动物细胞培养和核移植技术

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1、植物细胞工程常用的技术手段有哪些？那么动物细胞工程常用的技术手段呢？植物组织培养,植物体细胞杂交问题探讨2.2动物细胞工程生产单克隆抗体等动物细胞工程常用的技术动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的基础。2.2.1动物细胞培养和核移植技术从动物机体中取出相关的，将它分散成，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞。（一）概念：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官如：肾、肺等细胞生命力旺盛，分裂能力强组织单个细胞生长和增殖原理：细胞增殖使细胞和培养液充分接触一.动物细胞培养过程?注意关键词:细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养胰蛋白酶或

2、胶原蛋白酶动物组织(剪碎)分散成单个细胞细胞悬液胰蛋白酶或胶原蛋白酶原代培养传代培养动物细胞培养过程强调一：细胞贴壁过程■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。(单层细胞)强调二：接触抑制细胞的接触抑制强调三:原代培养：指将要培养的动物细胞取出后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，

3、配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。(二)动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液10代细胞50代细胞剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶原代培养用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。动物细胞培养不能最终培养成生物体细胞增殖缓慢，核型可能变化动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来

4、形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。贴壁生长接触抑制10代以内，保持正常二倍体核型传代培养总结：动物细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液剪碎用胰蛋白酶处理10代细胞转入培养瓶10-50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液稀释传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变）分瓶传代培养原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。原代培养细胞株：细胞能传代到40-50代，遗

5、传物质没有发生改变，这种传代细胞叫细胞株。强调：细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系）细胞系：传代50代以后又出现细胞生长停滞状态，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，这种传代细胞叫细胞系。▲细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（取材）细胞悬液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液（分解细胞间的蛋白质）原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎过程：细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质遗传物质一般未改变遗传物质已改变2、过程取的组织

6、、器官细胞悬浮液酶贴满瓶壁的细胞单个细胞加入液动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养接触抑制原代培养1-10代细胞40—50代细胞(细胞株)传代培养无限传代（细胞系）用处理胰蛋白酶有关概念:原代培养：指将要培养的动物细胞取出后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：

7、细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞必须在固定的表面上生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变要求培养瓶内表面光滑、无毒，易于贴附进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？P44旁

8、栏用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.