分子生物学原理DNA的生物合成

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1、中心法则的研究过程9/3/2021分子生物学原理第三篇基因信息的传递遗传信息流动方向－中心法则9/3/2021分子生物学原理半保留复制模式的实验证明9/3/2021分子生物学原理第十章复制半保留复制：DNA进行复制时，双螺旋结构解开而成为两股单链，各自作为模板，用于合成新的互补链。子代细胞出现新的DNA双链，其中一股单链是从亲代完整地接受过来的，另一股单链是完全重新合成，且与母链按碱基配对原则互补。也就是说，两个子代细胞的DNA双链，都和母细胞DNA碱基序列完全一致。9/3/2021分子生物学原理第一节参与

2、DNA复制的酶底物：脱氧三磷酸核苷聚合酶：依赖DNA的DNA聚合酶模板：解开成单链的DNA母链引物：一段寡核苷酸其它酶和蛋白质因子:起解链、理顺双螺旋、稳定单链的作用。连接酶。9/3/2021分子生物学原理一、DNA聚合酶大肠杆菌中有DNA聚合酶I，II和III。PolIII被认为是原核生物细胞内真正起复制作用的酶。PolI可以被蛋白酶分成大小片段，大片段有DNA聚合酶的活性，称为Klenow片段。真核生物中发现的DNA聚合酶有、、和。9/3/2021分子生物学原理DNA聚合酶催化的反应5’到3’的

3、聚合活性(dNMP)n+dNTP(dNMP)n+1+Ppi9/3/2021分子生物学原理DNA聚合酶催化的反应5’到3’的聚合活性(dNMP)n+dNTP(dNMP)n+1+Ppi核酸外切酶活性(从5’或3’末端把核苷酸从核酸链上水解下来)9/3/2021分子生物学原理DNA聚合酶的性质以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为前体催化合成DNA需要模板和引物不能起始合成新的DNA链催化dNTP加到生长中的DNA的3’-OH末端催化DNA合成的方向是5’到3’。9/3/2021分子生物学原理复制的保真性DNA复制

4、保真性至少依赖三种规律：1.遵守严格的碱基配对规律。2.聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能。3.复制中出错时有即时的校读功能。9/3/2021分子生物学原理解旋、解链酶复制应先解开DNA的超螺旋、双螺旋结构。解旋、解链酶类：解链酶、DNA拓扑异构酶、单链DNA结合蛋白。9/3/2021分子生物学原理解链酶解链酶是rep，它在ATP存在时解开DNA双链，每解开1对碱基，需要消耗2个ATP。另一种为解旋酶II。在解链过程中，已解开的DNA双链之一，其解链方向与复制方向一致，称为领头链；另一链复制方向与解链方向相

5、反，称为随从链。9/3/2021分子生物学原理DNA拓扑异构酶拓扑酶对DNA分子的作用都是既能水解，又能连接磷酸二酯键。拓扑酶I：不需要ATP，切断DNA双链中的一股，使DNA解链旋转中不打结，适当的时候又把切口封闭，使DNA变成松驰状态。拓扑酶II在无ATP时，切断处于超螺旋的DNA分子，使超螺旋松驰。在有ATP时，松驰状态的DNA进入负超螺旋状态，断口在同一酶催化下再连接起来。9/3/2021分子生物学原理单链DNA结合蛋白单链结合蛋白(SSB)的作用是在复制中维持模板处于单链状态并保护这种单链的完整性

6、。9/3/2021分子生物学原理引物酶和引发体复制是在一段RNA引物的基础上加进脱氧核苷酸的，催化引物合成的是一种RNA聚合酶，它不同于催化转录过程的RNA聚合酶，因此称为引物酶。引物酶在模板的复制起始部位催化互补碱基的聚合，形成短片段RNA。在解链酶结合其它复制因子而可辨认起始点时，就可再结合引物酶，形成引发体。9/3/2021分子生物学原理DNA连接酶DNA连接酶连接DNA链3’-OH末端和另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用在原核细胞

7、需要消耗NAD＋，在真核细胞则消耗ATP。连接酶连接的都是碱基互补基础上的双链中的单链缺口，它并没有连接单独存在的DNA单链或RNA单链的作用。9/3/2021分子生物学原理三种酶催化生成磷酸二酯键的比较9/3/2021分子生物学原理9/3/2021分子生物学原理第二节DNA复制过程复制的起始复制的延长复制的终止9/3/2021分子生物学原理复制的起始原核生物总是从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制。真核细胞染色体比较复杂，可能有多个复制起始点，同时形成多个复制单位。复制开始后由于DN

8、A双链解开，在两股单链上进行复制，在电子显微镜下均看到伸展成叉状的复制现象，称为复制叉。9/3/2021分子生物学原理复制起始的步骤1.引物酶按碱基配对规律合成RNA引物。2.在DNA聚合酶III的作用下，靠酶的亚基辨认引物，新链第一个脱氧核苷酸就加到引物的3’-OH末端上，形成磷酸二酯键。3.DNA拓扑异构酶(可能主要是II型酶的作用)，在将要打结或已打结处作切口。4.单链DNA结合蛋白(SSB)结合于开放的