GBT14643.6-1993 工业循环冷却水中铁细菌的测定 MPN法.pdf

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1、中华人民共和国国家标准工业循环冷却水中铁细菌的测定MPN法GB/'r14643.6-93Industrialcirculatingcoolingwater-Examinationofironbacteria-MPNtest1主题内容与适用范围本标准规定了工业循环冷却水中铁细菌的测定方法。本标准适用于工业循环冷却水中铁细菌的测定，也适用于原水、生活用水及粘泥中的铁细菌的测定。2引用标准GB603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要本法采用多试管发

2、酵技术，在29士1℃培养14d,如果试管内棕色消失而且形成褐色或黑色沉淀，表明阳性反应，采用MPN技术，对被测试样中的铁细菌进行计数。4试剂和材料本试验方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水规格的水。4.1硫酸镁(GB671)。4.2硫酸钱(GB1396);4.3磷酸氢二钾(HG3-1228);礴.4氯化钙;4.5硝酸钠(GB636);4.6柠檬酸铁按;4-7氯化钠(GB1266);4.8氢氧化钠(GB629)溶液:46g/1-;4.9盐酸(GB622)溶液-1+11;

3、4.10硫代硫酸钠(GB637);4-11乙醇(GB678)溶液:75%(v/v);4.12牛皮纸;4.13医学脱脂棉。仪器和设备无菌箱(室)或超净工作台;:;蒸汽压力灭菌器;国家技术监督局1993一08一06批准1994一07一01实施.www.bzxzk.com.GB/T14643.6一935.3生化培养箱;5.4电热干燥箱:温度可控制在(60-280)120C;5.5刻度吸管;1mL;5.6刻度吸管:5mL;5了试管:150mmX15mm;5.8试管架;5.9磨口三角瓶:100mL;5.1

4、0磨口试M瓶,1OOOML;5.11容量瓶;1OOOmL,6试验前准备6.，培养基的制备称取下列试剂:硫酸镁。.5g;硫酸钱0.5g;硫酸氢二钾。.5g;氯化钙0.29;硝酸钠。.5g;柠檬酸铁按10.0g,将上述试剂溶解在1OOOML水中，用氢氧化钠溶液(4.8)或盐酸溶液(4.9)调节pH至6.8士。2,并分装在试管中，每管5mL,塞上棉塞，数支一捆，每捆管口用牛皮纸包扎，用蒸汽压力灭菌器121士10C灭菌15-in,6，2无菌稀释水的制备6.2.1生理盐水的配制:称取8.50g氯化钠溶解在

5、1OOOmL水中，混匀。6.2.2将生理盐水(6.2.1)分装在100mL磨口三角瓶中，每瓶45mL。每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口用牛皮纸包扎以防污染，用燕汽压力灭菌器121士1℃灭菌15min,63刻度吸管的灭菌6.3.1将洗净并烘干后的刻度吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10^-15mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.3.2每支刻度吸管用一条约40-50mrn宽的牛皮纸条，以45，左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多

6、余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于16。士2C灭菌2h,6.4采样瓶的灭菌将洗净并洪干后的1OOOmL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热千燥箱中，于160士2C灭菌2ha65硫代硫酸钠灭菌将硫代硫酸钠放入无菌箱(室)内，并均匀地摊在离紫外线灯30cm处，灭菌30min,7测定步骤了1水样的采集7}1.1用无菌采样瓶采集被测样品，在采样过程中，要保护瓶口和颈部，防止这些部分受杂菌污染，瓶内要留下足够的空间，以备测定之前摇匀。7.1.2若采集的水中有

7、余熟，应在采样前，在无菌操作下，于无菌采样瓶(6-4)中加人灭过菌的硫代硫.www.bzxzk.com.SBIT14643.6一93酸钠(6-5)，加入的量为每升水样约。.1g,7.1.3水样采集后立即进行测定，如果在2h内不能进行测定，应把水样放在冰箱中，4^-10℃保存，存放时间不宜超过24h经冷冻保存后的水样需测定时，从冰箱中取出，30"C左右活化4-5h，再进行测定了.2无菌箱(室)灭菌把试验所用的无菌培养基、无菌稀释水、无菌吸管等用品放人无菌箱(室)内，打开紫外线灯灭菌30min.7.

8、3水样的稀释和接种73飞水样放人灭过菌的无菌箱(室)(7幻中，立即用75%(vlv)乙醉溶液的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱(室)内的酒精灯。7.3.2-7.3.6的操作应在无菌箱(室)内的火焰区进行。7.3.2选择适宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种培养后无铁细菌生长，在空白稀释水样瓶(6.2)上标上稀释度数。7.3.3用10倍稀释法稀释水样，即用5mL无菌吸管(6.3)吸取5mL水样注人到45mL空白稀释水中充分摇匀，此时稀释度为10-',7.3.4另取一支5rtLL无菌吸管吸取5mL稀释度为