液相色谱的柱和系统故障检修

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1、2021/8/61六、色谱柱和色谱系统的故障检修每个HPLC使用者应该知道什么2021/8/62HPLC的组成泵进样器/自动进样器色谱柱检测器数据系统/积分仪表所有这些部件可能出现故障而需要检修。2021/8/63HPLC的组成2021/8/64色谱柱问题的类型A.压力B.峰形C.保留时间2021/8/65A压力问题色谱柱观测潜在的问题压力高堵塞滤头色谱柱污染堵塞填料2021/8/66查出原因纠正压力有／无柱子时检查压力①去柱后②去柱前③去预柱………….许多压力问题是由于系统或保护柱的阻塞如果柱压高:①冲洗柱子:排除柱污染和填料堵

2、塞包括：高分子量／被吸附化合物样品或缓冲液中的沉淀物②反冲柱子－清洁阻塞的滤头③更换滤头2021/8/67ColumnCleaning柱子清洗用比你的流动相更强的溶剂冲洗为了增加强度选择反相溶剂对于分析柱每种溶剂至少用25ml冲洗没有缓冲盐的流动相100%Methanol甲醇100%Acetonitrile乙腈75%Acetonitrile:25%Isopropanol75%乙腈：25％异丙醇100%Isopropanol异丙醇100%MethyleneChloride★二氯甲烷100%Hexane★已烷当用已烷蔌二氯甲烷柱子时,

3、必须先用异丙醇冲洗,然后再用你的反相流动相2021/8/68柱子清洗为了增加强度选用正相溶剂或：每种溶剂至少用50ml50%甲醇:50%氯仿乙酸乙酯2021/8/69怎样更换滤头柱进口滤头戴手套不要让底座干燥不要使柱身受热,否则填料会喷出不要旋得太紧旋好尾端螺母旋好尾端螺头2021/8/610压力问题的预防柱保护保护柱/预柱在线过滤器样品预处理适当的柱冲洗过滤缓冲流动相2021/8/611压力问题的预防:在线装置MobilePhasePre-ColumnInjectorFilterGuardFromPump预柱进样器滤头Colum

4、n从泵来的流动相保护柱AnalyticalColumnFilterandGuardColumnActonSample分析柱滤头和保护柱作用于样品Pre-ColumnActsonMobilePhase预柱作用于流动相ToDetector到检测器2021/8/612压力问题的预防:样品制备溶剂/化学环境微粒/凝聚物的除去Filtersamples过滤样品Centrifugation离心分离固相萃取薄层板生物膜2021/8/613B峰形问题Splitpeaks裂峰Peaktailing峰拖尾Broadpeaks宽峰Poorefficie

5、ncy低柱效许多峰形问题是结合在一起的-例如:展宽和拖尾或拖尾和保留时间增加2021/8/614裂峰可能的原因:Columncontamination柱污染Partiallypluggedfrit部分阻塞滤片Columnvoid柱头塌陷Injectionsolventeffects溶剂效应2021/8/615裂峰柱污染Column:StableBondSB-C8,4.6×250mm,5µmMobilePhase:60%25mMNa2HPO4,pH3.0:40%MeOHFlowRate:1.0mL/minTemperature:35

6、ºCDetection:UV254nmSample:1.Pseudoephedrine2.APAP3.Unknown4.ChlorpheniramineInjection1峰3峰形较好Injection30峰3裂峰Injection1AfterColumnWashwith100%CAN经100%乙腈冲洗后峰3峰形极好2021/8/616裂峰溶剂化效应Column:StableBondSB-C8,4.6×250mm,5µmMobilePhase:82%H2O:18%ACNInjectionVolume:30µLSample:1.Ca

7、ffeine咖啡因2.Salicylamide水杨酰胺A.InjectionSolventB.InjectionSolvent100%AcetonitrileMobilePhase峰形宽拖尾峰形尖锐对称样品溶剂尽可能与流动相匹配2021/8/617裂峰原因的确定复杂样品的基质或分析许多样品------柱污染或部分阻塞滤片流动相pH>=7------由于硅胶溶解使柱塌陷(除非使用专门的柱子)--------预柱与柱的塌陷样品的量大------裂峰和宽峰,由样品量来决定2021/8/618峰拖尾、变宽和柱效降低可能的原因柱“次级效应”

8、（硅醇基效应）柱塌陷柱污染柱老化柱负荷超载柱外效应2021/8/619峰拖尾柱“次级效应”（扫尾剂）Column:Alkyl-C8,4.6×150mm,5µmMobilePhase:85%25mMNa2HPO4,pH7.0:15%ACNFlowRa