生理活动活体染色

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1、CELLBIOLOGY细胞生物学实验前确定实验用具、药品是否齐全检查实验用具是否清洁、无污染，这是实验成功的首要条件实验过程中尽量保持安静多动手多动脑，不局限于要求的实验内容实验结束后清理实验台、清洗实验用具离开实验室前检查实验用具是否齐全值日生清理实验台、水池、地面实验注意事项实验分组：自由组合，每组2-4人。值日分组：7组今天实验内容细胞的渗透现象细胞生理活动巨噬细胞吞噬动、植物细胞的液泡系活体染色1.1细胞的渗透现象细胞内外存在渗透压差时水分子总是从渗透压低处扩散到渗透压高处，这种现象称为渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。细胞

2、膜是细胞与环境进行物质交换的选择性屏障。细胞膜具有通透性,是半透膜。当细胞处于低渗溶液中时，水分进入细胞,可使细胞胀破.当细胞处于高渗溶液中时，细胞失水，原生质浓缩，细胞皱缩。实验原理细胞的渗透现象植物细胞与外界水溶液构成的渗透系统细胞膜液泡质液泡膜原生质层质壁分离:当外界溶液浓度大于细胞液浓度时细胞失水发生收缩,由于细胞伸缩性小不能随原生质浓缩变形,细胞膜与细胞壁之间出现分离.质壁分离的复原:当外界溶液浓度小于细胞液浓度的时候，水可进入细胞,使细胞恢复原来状态.实验准备材料:洋葱、家兔红细胞悬液、1%鸡红细胞悬液、小白鼠仪器和器材:显

3、微镜、眼科剪子、眼科镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸试剂:500U/ml肝素、0.4%1.2%和4%的氯化钠水溶液、含有台酚蓝6%淀粉肉汤动物细胞的渗透现象1.2%NaCl盖片、观察盖片、观察0.4%NaCl一滴兔红细胞悬液一滴兔红细胞悬液一滴兔红细胞悬液盖片、观察实验操作植物细胞的渗透现象一小块洋葱表皮一滴清水盖片、观察盖片、观察一小块洋葱表皮4%NaCl取下盖玻片，在一侧滴清水，另一侧吸出观察质壁分离复原1.2巨噬细胞的吞噬单核细胞：由骨髓生成，在血液内仅生活3～4天，即进入肝、脾、肺和淋巴等组织转变为巨噬细胞。变为巨噬细胞后，体积加大

4、，溶酶体增多，吞噬和消化能力也增强。巨噬细胞吞噬对象：病毒、疟原虫和细菌等。巨噬细胞还参与激活淋巴细胞的特异免疫功能。巨噬细胞能够识别和杀伤肿瘤细胞，清除衰老与损伤细胞实验原理白细胞机体的防御细胞粒细胞系单核细胞系淋巴细胞系巨噬细胞吞噬过程由于趋化作用向异物游走伸出伪足包绕异物内吞作用将异物吞入细胞吞噬泡与溶酶体融合异物被消化实验操作实验前两天每天向小白鼠腹腔注射淀粉肉汤（台酚蓝），实验前30分钟腹腔注入1ml鸡红细胞悬液处死、剖开腹腔1ml生理盐水搅拌取腹腔液滴片观察液泡系的活体染色液泡系（vacuoles）细胞内凡是由膜包裹的小泡和

5、液泡，除线粒体和质体外，都属于液泡系，都由单层膜包围。种类：动植物细胞都含有液泡，共有约13种，有些为植物细胞所特有。高尔基液泡、收缩泡、包被小泡：溶酶体、圆球体、糊粉粒：含各种水解酶，功能是消化，由内膜系统生成；微体：过氧化物酶体、乙醛酸循环体，特殊代谢酶系；消化泡、吞噬泡、残体：与胞吞作用相关；中央液泡：由起源于内质网的小泡合并而成。液泡系的一般性质动物细胞高尔基区的液泡主要功能是蛋白质的浓缩与凝结，软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维等，因而液泡系发达。植物细胞幼期，液泡很小，但随着

6、细胞生长，液泡长大。小液泡逐渐合并为大液泡，位于细胞中央，占有大部分的细胞体积。植物细胞的大液泡主要成分为水，起渗透调节作用。液泡中溶解的溶质种类繁多，其来源与质膜、内质网、高尔基器关系密切。活体染色是能使生活的细胞或组织特异性着色，但对活样品又没有毒害作用的一种染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动，也不产生任何物理、化学变化，不会引起细胞死亡。并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。詹纳斯绿B(Janusgreen B)和中性红(neutra

7、l red)是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。中性红只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色。细胞的活体染色一小块胸骨剑突中性红10min吸去染液加一滴Ringer盖片观察一块洋葱内表皮中性红-詹纳斯绿B30min盖片观察实验内容成熟植物细胞的中央大液泡植物细胞中央大液泡的演变过程一滴兔红细胞悬液盖片、观察一滴兔红细胞悬液+1.2%NaCl盖片、观察一滴兔红细胞悬液+0.4%NaCl盖片、观察一小块洋葱表皮+一滴清水盖片、观察一小块洋葱表皮+4%NaCl盖片、观察取下，盖玻片一侧滴清

8、水，另一侧吸出观察质壁分离复原小鼠处死、剖开腹腔1ml生理盐水搅拌取腹腔液滴片观察蟾蜍处死一小块胸骨剑突中性红10min吸去染液加一滴Ringer盖片观察一块洋葱内表皮中性红-詹纳斯绿B30min盖片观察（