《超氧化物歧化酶》PPT课件

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1、超氧化物歧化酶(SOD)的生产第六组钱龙SOD知识简介1.SOD的概念超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。2.SOD的分类按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种SOD知识简介3.SOD的理化性质3.1SOD对氰化物和H2O2的敏感性长时间用过氧化氢处理可使CuZn-SOD和Fe-SOD失活，而Mn-SOD不受影响3.2SOD的吸收光谱特性CuZn-SOD具有独特的紫外吸收光谱。由于色氨酸和酪氨酸的含量较低，它在280nm处并没有最大吸收峰。CuZn-SOD的可见光最大吸收波长都在680nm左右，这反

2、映了酶分子中Cu2+的光学特性。SOD知识简介3.3SOD稳定性及影响因素3.3.1PH、热、蛋白酶的影响：SOD在pH5.3～9.6间催化性能良好，在pH4.5～pH11间能稳定存在。pH3.6时，CuZn-SOD中95%的Zn要脱落，在pH12.2时，SOD的构象会发生不可逆的转变而使酶失活。3.3.2SOD对热的稳定性与溶液中离子强度有关。当离子强度很低时,即使加热到95℃,其活性损失也很少其他因素：SOD活性受饮料的色泽、成分、酸碱度、乙醇含量等多种因素的影响，只有在无色、近中性、无乙醇饮料中SOD活性较稳定。另外还发现有机溶剂和Cl对SOD的活性具抑制作用SOD的作用welcome

3、tousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience它催化超氧阴离子转化为H2O2和O2的反应，即催化超氧阴离子自由基O2-·发生歧化反应，从而清除O2-·，2O2-·+2H+→H2O2+O2，在生命体的自我保护系统中起着极为重要的作用，在免疫系统中也有重要的功，因而它能防御氧毒性，增强机体抗辐射损伤能力，防衰老。实训目的（1）掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。2）了解酶在提取过程中的两个参数：回收率、纯化倍数。3）掌握离心机的使用。实训原理welcometousethesePowerPointtemplate

4、s,NewContentdesign,10yearsexperience邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。实训器材welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience大蒜，冷丙酮，磷酸缓冲液（PH7.8，0.0

5、5mol/L)氯仿-乙醇混合液邻苯三酚浓盐酸仪器：天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管（8）、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶（8个）、玻璃棒（8根）、试剂瓶250mL（3个）、500mL（3个）、250mL烧杯（16个）、试管带胶塞(80根)、移液管(5根)SOD的生产1.SOD酶的提取称取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸缓冲液（pH7.8）15ml，继续研磨20min,使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然后6000r/min冰冻离心15min，放弃沉淀，取上清液。2.去除杂蛋白上清液中加入0.25倍体积的氯仿——乙醇混合液搅拌1

6、5min,6000r/min离心15min，放弃沉淀，得到的上清液即是粗酶液SOD的生产3.SOD酶的沉淀分离粗酶液在搅拌下缓慢加入固体硫酸铵至饱和浓度60%，持续搅拌15min，6000r/min离心15min，得到SOD酶沉淀4.将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯化，然后超滤浓缩。SOD的生产5.用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量6.将浓缩冷冻干燥后即得成品。连苯三酚自氧化速率的测定取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入10连苯三酚液，迅速摇匀空白：

7、取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入10缓冲液，迅速摇匀倒入光径1cm的比色杯中，在325nm波长下于恒温池中每隔30s测A值一次计算线形范围内，每1minA的增值，此即连苯三酚的自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min酶活测定测定方法与测连苯三酚自氧化速率相同取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10连苯三酚液，迅速摇匀空白：取1.5ml缓冲液，