《菌种的复壮与保藏》PPT课件

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1、第二章菌种的退化、复壮与保藏第一节菌种的退化和复壮一、菌种的退化（一）原因菌种保藏不妥菌种生长的条件要求没有得到满足自身突变和自发突变（二）菌种退化的表现生产性状劣化，遗传标记丢失，原有的典型性状变得不典型。菌落及细胞形态的改变；生长速度缓慢，产孢子越来越小；代谢产物生产能力下降；抗不良环境条件（抗噬菌体，抗低温）能力减弱总之，退化是发生在群体细胞中的一个从量变到质变的逐步演变过程，由于个别突变细胞表现生长优势，导致在群体中最后数量占优势。（三）菌种退化的防治从菌种选育方面考虑1)尽量使用孢子或单核菌株2)诱变处理后的菌株应充分的分离纯化，保证获得菌株的纯度

2、。控制传代次数尽量避免不必要的移种和传代，以减少细胞分裂过程中所产生的自发突变几率。创造良好的培养条件1)结构类似物抗性菌株在保藏培养基中应添加相应药物，及时淘汰回复突变细胞。2)基因工程菌添加抗生素于培养基中防止质粒的丢失采用有效的菌种保藏方法从菌种管理的措施上考虑菌种复壮二、菌种的复壮侠义的复壮：菌种已经发生衰退后，再通过纯种分离和性能的测定等方法，从衰退的群体中找出尚未衰退的少数个体，以达到恢复该菌种原有典型性状的一种措施。广义的复壮：一种积极的措施，即在菌种的生产性能尚未衰退前经常有意识地进行纯种分离和生产性能的测定工作，使菌种地生产性能逐步提高。对

3、已衰退菌种配合一定培养条件进行单细胞分离纯化淘汰衰退的个体通过寄主体内进行复壮改变培养条件诱变剂处理复壮措施方法第二节菌种的保藏一、理想的菌种保藏方法应具备的条件1经长期保藏后菌种存活健在；2保证高产突变株不改变表型和基因型，特别是不改变初级代谢产物和次级代谢产物生产的高产能力。3菌种保藏的基本措施是低温、干燥、真空。世界上国际知识产权组织承认的法定保藏机构有28家。Ex：美国的标准菌种保藏所（ATCC）美国农业部农业研究服务部（ARS）英国国立标准菌种保藏所（NCTC）我国：1普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC）2农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）

4、3工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）4医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）5抗生素菌种保藏管理中心（CACC）6兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）二、微生物菌种保藏技术原理：根据微生物的生理生化特性，人为地创造条件，使孢子或菌体处于代谢不活泼，生长繁殖受到抑制的休眠状态，以减少菌种的变异。一般可通过保持培养基营养成分在最低水平，缺氧状态，干燥和低温等。斜面保藏法穿刺保藏法沙土管干燥保藏法真空冷冻保藏法液氮保藏法悬滴保藏法低温保藏法斜面保藏法接种适宜斜面培养基→培养→4℃保藏适用：各大类保藏期：3~6个月缺点：保存期短，传代多，易退化点接：把菌种点接

5、在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。中央划线：从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。密波状蜿蜒划线法:从斜面底部自下而上划密“之”字形线。能充分利用斜面获得大量菌体细胞，适用于细菌和酵母菌等。挖块接种法:挖取菌丝体连同少量培养基，转接到新鲜斜面上。适用灵芝等担子菌类真菌。斜面接种法培养：将接种后的培养基放入培养箱中，在适宜的条件下培养至细胞稳定期或得到成熟孢子。细菌培养温度一般为30～37℃，真菌培养温度一般为25～28℃。保藏：培养好的菌种于4～6℃保存，根据要求每3～6个月移植一次。某些菌种，如芽裂酵

6、母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等，须1～3个月移植一次。保藏湿度用相对湿度表示，通常为50%～70%。斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照，防止因意外和污染造成损失。半固体穿刺保藏法穿刺接种适宜半固体→培养→4℃保藏适用：好气性细菌，酵母等保藏期：6~12个月用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养基中心自上而下刺入，至培养基的1/2处，待微生物生长良好后覆盖2~3mm无菌液体石蜡.石蜡可防止培养基失水又隔绝氧气,降低代谢.但不适用于可以石蜡为碳源的微生物.如固氮菌、分枝杆菌等。砂土管干燥保藏法措施：无营养，缺氧，干燥方法：孢子或芽孢悬液→加入无菌砂土管中

7、→干燥→封口→5℃保藏适用：产孢子的丝状真菌、放线菌；有芽孢的细菌保藏期：2~10年或更长河沙60目筛弃去大颗粒及杂质80目筛去掉细沙吸铁石吸去铁质10％～20％的盐酸浸泡24h去除有机物水洗至中性烘干或晒干土：取地面下40～60cm非耕作层贫瘠且粘性较小的土，研碎，100目过筛,水洗至中性，烘干。将处理后的沙、土按质量比2∶1混合。混匀的沙土分装入安瓿管或小试管中，高度为1cm左右，塞好棉塞，121℃高压间歇灭菌2~3次，烘干备用。沙土管制作沙：向培养好的斜面培养物中注入3～5mL无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。用无菌吸管吸取菌悬液，均匀滴入沙土管中，每

8、管0.2～0.5mL。放线菌和霉菌可直接挑取孢子拌入