《考马斯亮蓝法测定》PPT课件

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1、考马斯亮蓝法测定紫菜可溶性蛋白含量提纲前言材料与方法结果与分析研究目的及意义前言1紫菜的生物学特征紫菜（Porphyra）属于红藻门（Rhodophyta）红藻纲（Rhodophyceae）红毛菜亚纲（Bangiophycidae）红毛菜目（Bangiales）红毛菜科（Bangiaceae）。目前报道的种类约有130多种，广泛分布在世界各地。东亚地区属紫菜盛产区域，条斑紫菜（Porphyrayezoensis）是中、日、韩三国共同栽培品种，在我国长江以北广泛栽培，而在长江以南栽培的坛紫菜（P.haitanensis）属我国特有。条斑紫菜为北太平洋西部特有

2、的种类，自然界主要分布于我国东海北部和黄、渤海沿岸，以及日本列岛和朝鲜半岛沿岸。条斑紫菜藻体为叶片状，叶形多为卵形或长卵形，随生长环境有较大的变化。坛紫菜主要产于我国福建和浙江沿海，盛产于福建的平潭、莆田、惠安等县，为我国特有的暖温带性种类，藻体披针形、亚卵形或长卵形。紫菜的营养价值紫菜（Porphyra）作为一种经济价值巨大的栽培红藻，以其营养丰富、口感良好深受特别是东亚地区人民的喜爱。紫菜中含有丰富的蛋白质、氨基酸、多糖、膳食纤维、胡萝卜素、维生素A、维生素B1、B2，维生素C、维生素B12和胆碱等多种有机物质，同时还含有人体所需的Ca、P、Fe、Mg

3、、I、Se、Zn和Mn等多种矿物质。刘兴宽，郁建平(2008)在对沿海滩涂甘紫菜营养成分分析中，检测出15种游离氨基酸和16种水解氨基酸，必需氨基酸占游离氨基酸总量的24．35％，占水解氨基酸总量的39.81％；维生素和微量元素种类多、含量高，样品中Vc含量为17.2mg／100g；微量元素中Na的含量最高为356.7mg／100g，其次是Ca、Mg和K，Pb和Cu的含量远低于指标值。仲明等（2003）在对条斑紫菜不同采收期主要营养成分变化情况中指出条斑紫菜的钙、镁、锌和碘含量较丰富，尤其是钙和碘含量较多，铅、镉含量均低于食品卫生标准。所含的维生素种类多、

4、含量高，明显高于动物性食品，胡萝卜素、维生素E含量尤为突出。蛋白质的含量是衡量紫菜品质优劣的一项重要指标。紫菜中的蛋白质含量随着藻的种类及生长时间、地点等而有所不同，通常蛋白质质量分数占紫菜干质量的25%～50%。牛建峰等（2006）利用Bradford法，测得60℃恒温干燥的带形蜈蚣藻可溶性总蛋白质量分数为0.33％，带形蜈蚣藻是红藻门蜈蚣藻属植物，其可溶性蛋白含量很少。刘淑梅等（2009）对9份辣椒种子的可溶性蛋白含量进行了测定，结果表明辣椒种子蛋白含量为25.65％～29.22％，远高于其他蔬菜类作物的蛋白质含量，辣椒种子蛋白质含量是辣椒皮的20倍，

5、辣椒种子蛋白质仅低于大豆的蛋白含量(36.23％~49.26％)。这表明辣椒种子具有较高的蛋白质开发价值。粱月等（2010）通过对布泽乌区采集的不同品种浆果分析得出可溶性蛋白含量从22.39％~45.35％，含量很高。蛋白质的测定方法在许多蛋白质研究的领域中，用一种快速准确的方法来检测蛋白浓度是必不可少的。目前测定蛋白质含量的方法有多种，如凯氏定氮法、双缩脲法、紫外吸收法、等电点沉淀法、考马斯亮蓝染色法等几种方法，但就方法的准确性和精密度以及应用程度而言，国际经典测定方法——凯氏定氮法为首选。现在尽管有很多先进的自动或半自动凯氏定氮仪，但这些仪器不仅价格昂

6、贵，且需专门试剂，目前尚难普及[21]。一种新建立的考马斯亮蓝法在许多实验中已成为首选方法用来定量的检测蛋白浓度。凯氏定氮法测定蛋白质最常用的方法是凯氏定氮法。凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定过程。在催化剂作用下,试样用浓硫酸消煮破坏有机物,使其中的蛋白质氮及其他有机氮转化为氨态氮,然后与硫酸结合生成硫酸铵,加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出含氮量,将结果乘以换算系数,计算出粗蛋白质含量。然而该方法存在消化时间太长,会产生有毒有害该方法存在消化时间太长，会产生有毒有害气体，因此必须在通风橱中进行的弊端。宗留香等人对这

7、一传统方法进行了改进，即用Se粉作催化剂进行消化，不用通风橱，即实现了环保消化，并提高了消化效率。考马斯亮蓝法考马斯亮蓝G一250测定蛋白质含量原理是属于染料结合法的一种，存在红色与蓝色两种不同的颜色形式。该染料在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中与蛋白质的疏水区结合时变为蓝色。考马斯亮蓝G—250与蛋白质结合反应十分迅速而且稳定，反应2min左右即达到平衡，其结合物可在室温下1h内保持稳定。考马斯亮蓝G-250法是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法，其最低蛋白质检测量可达1μg，比Lowry法的灵敏度高约4倍，这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质

8、—染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收随蛋白质浓度的变化比Low