《细胞信号转到》PPT课件

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1、phcausesnon-autonomousovergrowthinmosaiceyes主要技术手段：★MARCM技术★TUNEL法MARCM技术如果想在嵌合体中敲除基因，用FLP/FRT系统如果想在嵌合体中增加基因表达，用UAS/Gal4系统UAS/Gal4系统GAL4/UAS系统是一种转基因体系。原理：利用特定的启动子或增强子，以组织特异性的方式激活酵母转录激活子GAL4的表达，GAL4又以同样的方式引起GAL4反映元件（UAS）-靶基因的转录。GAL4UASUAS/Gal4系统FLP/FRT系统果蝇含有四对染色体，每对染色体中的一条被称为同源染色体，分别来自于母本和父本

2、。在正常的细胞分裂中，一对同源染色体总是能忠诚地复制，然后分配到新分裂的细胞中FLP是一个来自酵母的染色体重组酶FRT则是FLP催化的一段DNA序列同源重组产生会两个子细胞中，一个含有双份正常染色体，令一个含有双份突变染色体。如果我们在正常染色体上添加标示（GFP），那么，可以在果蝇组织中观察突变细胞的表型变化如果两条染色体中的一条是正常的，而另一条基因被突变掉，那么对于绝大部分没有重组的细胞来说，它们是“杂合体”。FLP/FRT系统MARCM技术(mosaicanalysiswitharepressiblecellmarker)同源染色体重组非同源染色体组合GAL80UAS

3、/GFP/mutation突变细胞TUNEL法—DNA片段化与检测细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的过程，染色体DNA首先在核酸内切酶作用下，随机切断；在核小体单位之间被随机切断。形成180-200bp核小体式片段；DNA双链断裂出现缺口即可产生一系列DNA的3’-OH末端，被染色。增加细胞膜通透性TdT酶和荧光素标记的dUTP进入细胞在TdT酶的辅助下dUTP与凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端结合HRP标记的抗荧光素抗体特异结合HRP底物，H2O2发生氧化、环化反应，形成棕褐色显微镜下观察TUNEL法—DNA片段化与检测TUNEL法—DNA片段化与检测