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1、兰州理工大学生命科学与工程学院毕业论文简介大青叶SRAP扩增体系的建立与优化专业名称：制药工程学号：08580208姓名：王亮指导教师：杨中铎职称：副教授摘要目的：建立并优化大青叶的SRAP-PCR扩增体系。方法:先对单因素（酶浓度，dNTP浓度，引物浓度，Mg2+浓度）进行筛选，然后用正交实验确立最优体系。结果：在50μL的反应体系中，,Taq酶的浓度为4U,dNTP的浓度为0.20mmol/L，引物的浓度为0.60μmol/L，Mg2+的浓度为1.0mmol/L时SRAP-PCR反应体系带型清晰，稳定性好。本研究建立的反应体系将为大青叶的种质资源鉴定及筛选
2、与4（3H）喹唑酮含量相关的基因奠定基础。关键词：大青叶；基因组DNA；SRAP分子标记Abstract：Objective:ToestablishandoptimizetheSRAPamplificationsystemofFolium.methods:First,todesignthesinglefactorexperiments(enzymeconcentration,dNTPconcentration,primerconcentrationofMg2+concentration),andthenusingtheorthogonalexperimentt
3、oestablishtheoptimalsystem.Results:intotal50μLreactionsystem,theTaqenzymeconcentrationis4U,dNTPconcentrationis0.20mmol/L,theconcentrationofthePrimeris0.60μmol/LandMg2+concentrationis1.0mmol/L.Underthiscondition,theamplificationpatternwithrichpolymorphismandclearbandisobtained,andhav
4、eagoodstability.EstablishthetheFoliumOptimizationalamplificationsystem,andthesuccessofthisexperimentwilmakethefoundationforFoliumthegermplasmandscreeningand4(3H)quinazolinonehighcontentrelatedgene.Keywords:FoliumGenomicDNASRAPmarkersOrthogonalOptimization一、综述1.1实验研究的背景大青叶是我国的传统中药，其味
5、苦、性寒、归心、胃经。具有清热解毒、凉血消斑的功效,用于温邪入营、高热神昏、发斑发疹、黄疸、热痢、痄腮、喉痹、丹毒和痈肿等症。尤其是通过抗SARS及甲流的中药筛选实验之后，证实了板蓝根具有良好的抗肺部炎症活性和抗甲型流感作用之后，菘蓝制剂的生产销售堪称中药之最。因此如何生产出产量和质量全优的药材，成为大青叶栽培育种的方向[1,2,3]。SRAP[4](Sequence-RelatedAmplifiedPolymorphism)分子标记是由美国加州大学蔬菜作物系Li和Quiros博士于2001年开发提出的，又称为基列扩增多态性(Sequence-BasedAmp
6、lifiedPolymorphism,SBAP)。该方法利用独特的引物设计对基因组开放阅读框区域(OpenReadingFrames,ORFs)进行扩增,针对基因外显子中富含GC而启动子和内含子中富含AT的特点来设计引物,无需任何序列信息即可直接进行PCR扩增,因不同个体、物种的内含子、启动子及间隔区长度不等而产生多态性。与常用的分子标记AFLP、RFLP、ISSR、6兰州理工大学生命科学与工程学院毕业论文简介SSR和RAPD比较，SRAP具有其它分子标记所不具有的优点。AFLP操作步骤繁琐，不易对每一步骤进行优化，虽然借助于AFLP试剂盒可取得比较好的效果，
7、但研究费用高；RFLP实验过程复杂，不易实现自动化，DNA要求高，量大；RAPD重复性低，产率低。SRAP标记将AFLP和RAPD两者的优点有机的结合起来，具有简便、稳定、产率高、便于克隆目标片段的特点，目前已在马铃薯、水稻、莴苣、油菜和大蒜等植物研究中使用，并应用于图谱构建、比较基因组学、遗传多样性分析[5,6,7,8,9]。1.2大青叶的化学成分研究进展[10,11,12]大青叶中主要含有喹诺酮化合物如4（3H）喹唑酮，苷类化合物如芸苔葡萄糖硫苷，吲哚类化合物如靛蓝、靛玉红，有机酸类化合物及其他一些化合物如氨基酸、挥发油等。其中4（3H）喹唑酮具有很好的抗
8、病毒作用是大青叶中的主要活性成分，而靛
