不同畜禽血样采集、哺乳动物白细胞分离

《不同畜禽血样采集、哺乳动物白细胞分离》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、华中农业大学动物科技学院实验一哺乳动物白细胞分离左波、柴进了解哺乳动物白细胞分离原理掌握兔及猪白细胞分离方法明确畜禽血液细胞组成差异一、实验目的二、实验原理真核基因组DNA存在于细胞核的染色质中血液新鲜组织福尔马林浸泡标本石蜡标本冰冻组织毛发体腔液洗嗽液精液1常用于DNA提取的材料：血液血浆（50-60%）晶体物质2-3%水份90-92%血浆蛋白5-8%血细胞（40-50%）红细胞白细胞血小板2血液组成红细胞又称红血球或红血细胞，是血液中最多的一种血细胞。红细胞中含有血红蛋白，因而使血液呈红色。人和哺乳动物的成熟红细胞无细

2、胞核白细胞白细胞无色呈球形，有细胞核，体积比红细胞大光镜下，根据白细胞胞质有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞。有粒白细胞又根据颗粒的嗜色性，分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。无粒白细胞有单核细胞和淋巴细胞两种白细胞有粒嗜酸性粒细胞中性粒细胞嗜碱性粒细胞无粒单核细胞淋巴细胞血小板也称血栓细胞，是体内最小的血细胞，是由骨髓中成熟的巨核细胞裂解、胞质脱落而成，呈圆形、椭圆或不规则的形状，无细胞核。但它并非只是细胞碎片，它有一定的结构，能进行新陈代谢。血小板的功能主要是促进止血和加速凝血血小板遇到粗糙的血管壁

3、伤口，就被破坏并释放出促使血液凝固的凝血酶。这种酶的前身是凝血酶原，在Ca2+参与下，凝血酶原激活物可催化凝血酶原转化为具有活性的凝血酶。在凝血酶、Ca2+和其它一些因子的作用下，经过一系列变化，可溶性的纤维蛋白原就变成了不溶性的丝状纤维蛋白。这种蛋白形成后，互相交织成网，并把血细胞网罗在内，使原来的血液凝集成块。3抗凝可通过以下几种途径来实现：（1）往血液中加入适量的抗凝剂（如柠檬酸钠）将Ca2+夺去，使其成为失钙血，这样可以防止纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而避免了血液凝固。（2）用试管刷反复搅拌，取出血液中的纤维蛋白，这

4、种血叫去纤维蛋白血。由于缺少了凝血必需物质（纤维蛋白），所以血液不再凝固。（3）降低血液温度，使酶的活性降低。（4）保护血小板，减少凝血酶的释放。抗凝剂（1）乙二胺四乙酸（EDTA）盐，EDTA有二钠、二钾和三钾盐。均可与钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。Na2C10H14O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na++2H+适用于全血细胞分析及血细胞比容测定。（2）柠檬酸钠（trisodiumcitrate），柠檬酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固2Na3C6H5O7+2Ca2+→2CaC6H

5、5O7+6Na+适用于红细胞沉降率和凝血功能测定。（3）草酸钠（sodiumoxalate），草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。适用于一般普通生化检查（4）肝素（heparin），肝素的阴离子活性基团与抗凝血酶III（AT-III）的阳离子基团结合，加速抗凝血酶-凝血酶复合体形成，灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，拮抗凝血酶和阻止血小板聚集。此外肝素还有催化抑制凝血因子Ⅹ的作用。适用于血流变检查从血管取少量血液加入适量抗凝剂,有形成分经自然沉降或离心沉淀后，血液可分出三层：上层为淡黄色的血浆，下层为

6、红细胞，中间的薄层为白细胞和血小板4白细胞分离5细胞破碎方法技术原理效果成本举例化学法渗透冲击渗透压破坏细胞温和便宜溶血酶消化法细胞壁被消化，使细胞破碎温和昂贵增溶法表面活性剂溶解细胞壁温和适中胆盐作用于大肠杆菌脂溶法有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳适中便宜甲苯破碎酵母细胞碱处理法碱的皂化作用使细胞壁融解剧烈便宜方法技术原理效果成本举例机械法匀浆法（片型）细胞被搅拌器劈碎适中适中动物组织及动物细胞研磨法细胞被研磨物磨碎适中便宜超声波法用超声波的空穴作用使细胞破碎适中昂贵细胞悬浮液小规模处理匀浆法（孔型）须使细胞通过的小孔，使细

7、胞受到剪切力而破碎剧烈适中细胞悬浮液大规模处理珠磨破碎法细胞被玻璃珠或铁珠捣碎剧烈便宜细胞悬浮液和植物细胞的大规模处理渗透冲击法（OsmoticShock）此法将一定体积的细胞液加到2倍体积的水中，细胞中溶质浓度高，水不断进入细胞，使细胞膨胀，最后导致破裂。在血浆中无机盐形成的渗透压称为晶体渗透压由血浆蛋白形成的渗透压称为胶体渗透压血浆渗透压的总值为两者之和。红细胞在此溶液中大小、形状不变，故称为生理盐水原理0.9%氯化钠溶液的渗透压与血浆渗透压相等血液中去除血细胞后余下部分就是血浆。将正常红细胞悬浮于不同浓度的NaCl溶

8、液中即可看到：在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加45%～60%则细胞膜损伤而发生溶血。红细胞在低渗溶液中会胀大，破裂，发生溶血，故低渗溶液不能用作静脉输液。高于或低于血浆渗透压的则相应地称为高渗或低渗溶