凝集素芯片使用说明

《凝集素芯片使用说明》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、材料目录1、芯片凝集素点阵2、凝集素芯片保存方法3、凝集素芯片使用方法4、所需试剂及其配置方法5、凝集素亲和性表一芯片上各个凝集素点阵□AALBPLDSLDBAECLAALBPLDSLDBAECLѺEELHHLJacalinLTLMALΠEELHHLJacalinLTLMALΠѺMPLNPLWBAEBLSTLMPLNPLWBAEBLSTLѺSBAUEAWGASWGAWFLSBAUEAWGASWGAWFLѺѺѺѺѺ说明：1、□是荧光位置标记位点，作为坐标2、每个凝集素重复两个点。二、凝集素芯片保存方法将凝集素芯片放

2、在芯片盒内（注意不要互相接触），放入4℃冰箱冷藏，可保持3-6个月。三、凝集素芯片使用方法（一）对细胞的检测细胞系细胞提取取对数生长期的细胞,倾去培养液，加入0.25％胶原酶Ⅳ（D-hank's），37℃消化1h，每隔10min吹打一次。1500r/min离心5min，收集沉淀。PBS洗涤2次，重悬备用（注：用胶原酶主要是怕损伤细胞膜糖链结构，如果没有，常规细胞培养的胰蛋白酶也可）如果对细胞进行荧光标记，在重悬后的细胞液中加入50-100ul的吖啶橙溶液，轻摇5min后PBS洗涤两次，重悬备用。体液细胞悬液的制备

3、胸腔积液、腹水等1500r/min离心5min后，倾倒上清液。按1:3的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液去除红细胞，轻轻吹打混匀。1500r/min离心5min，收集沉淀。PBS洗涤2次，重悬后进行细胞计数（1×104—1×106）。取少许上述细胞悬液，孵育到凝集素芯片上（如需荧光标记，重复上面荧光标记步骤）。组织细胞提取取动物组织，用肝素D-hank's液清洗后剪碎，0.25％胶原酶Ⅳ（D-hank's），37℃消化1h，每隔10min吹打一次。1500r/min离心5min，按1:3的比例向细胞沉淀中加入EL

4、S裂解液去除红细胞，轻轻吹打混匀。1500r/min离心5min，收集沉淀。RPMI1640洗涤2次，重悬备用。凝集素芯片孵育取出备用的凝集素芯片，于37℃湿盒内水化30min，0.5％酪蛋白溶液（PB，0.01mol/L，PH=7.2）封闭5min，PB缓冲液（0.01mol/L，pH=7.2）洗涤15min，将细胞悬液滴加到芯片上，覆盖住凝集素芯片矩阵，常温或者37℃孵育40min，PBS缓冲液（pH7.2）洗涤，3%戊二醛（PBS，pH7.2）固定2min（如不染色，固定一步可以省略）。凝集素芯片捕获细胞的

5、检测荧光标记的检测激光扫描仪扫描整个芯片常规P巴氏染色（Papanicolaou’sstain），观察捕获细胞位点，显微镜下观察（注：PE染色后吖啶橙荧光消失）。对蛋白的检测芯片准备处理同前检测方法1、蛋白直接荧光标记，扫描检测2、蛋白捕获后，加荧光二抗孵育，扫描检测3、蛋白孵育后，加其他标记的二抗检测。四、所需实际配置方法1、凝集素芯片封闭液0.5%酪蛋白溶解到PH=7.4的PB溶液里（0.01M），溶解过程需要煮沸加热，分装冻存。2、吖啶橙染色液0.05%吖啶橙PBS溶液。五芯片所用凝集素亲和性凝集素来源糖链

6、特异性DSLDaturastramonium(GlcNAc)n,polyLacNAcandLacNAc(NA3,NA4)MPLMaclurapomiferaGalβ1-3GalNAcα-Thr/Ser(T)andGalNAcα-Thr/Ser(Tn)WBAPsophocarpustetragonolobusα-GalNAcandGalJacalinArtocarpusintegrifoliaGalβ1-3GalNAcα-Thr/Ser(T)andGalNAcα-Thr/Ser(Tn)LTLLotustetrago

7、nolobusFucα1-3GlcNAc,Sia-LexandLexSBAGlycinemaxTerminalGalNAc(especiallyGalNAcα1-3Gal)BPLBauhiniapurpureaalbaGalβ1-3GalNAcandNA3,NA4WFLWisteriafloribundaTerminalGalNAc(e.g.,GalNAcβ1-4GlcNAc)MALMaackiaamurensisSiaα2-3GalAALAleuriaaurantiaTerminalαFucand±Sia-Le

8、xEELEuonymuseuropaeusGalα1-3[Fucα1-2Gal]>Galα1-3GalHHLHippeastrumhybridnon-substitutedα1-6ManEBLSambucusnigraSiaα2-6Gal/GalNAcSTLSolanumtuberosum(GlcNAc)nandpolyLacNAcsWGATriticumunlgaris