实验九土壤微生物的分离与计数

《实验九土壤微生物的分离与计数》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验八土壤微生物的分离与计数——涂布平板法一、实验目的1、学习利用平板分离法从土壤分离微生物的基本操作。2、掌握微生物平板计数的方法。二、实验原理土壤是微生物生活的大本营根据某微生物的生长条件（营养，酸碱度，温度，氧气等）而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌生长，而抑制其他菌生长；用稀释涂布平板法获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结合观察其菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）。稀释到适量浓度倾注或涂布平板培养菌落计数将待测样品适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到培养基上，经过繁殖每个单细菌长成肉眼可见的菌落，即一个菌

2、落代表样品中的一个单细胞。根据菌落数，稀释倍数，接种量可推算出原样品中的含菌数。样品充分混匀；同一稀释度三个以上重复，取平均值；每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数。一般用菌落形成单位（colonyformingunits，CFU）来表示原样品中的细胞数。三、实验材料1、土样：选择某一生境土壤，去表层土，挖5~20cm深度的土壤数10g，装入已灭菌的牛皮纸袋。2、培养基:牛肉膏蛋白胨培养基：细菌淀粉琼脂培养基（高氏1号）：放线菌——每300ml培养基加入1ml3%的重铬酸钾抑制细菌和霉菌生长马丁氏培养基：真菌——孟加拉红抑制细菌和放线菌1、倒平板2、土壤菌悬液的制备四

3、、实验方法10g土样+90ml无菌水振荡20min3、梯度稀释取1ml土壤菌悬液移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀，为稀释10倍的样品，依次进行梯度稀释10-1~10-6分离对象稀释度分离方法细菌10-4、10-5、10-60.1ml菌悬液，涂布法分离放线菌10-3、10-4、10-50.1ml菌悬液，涂布法分离霉菌10-2、10-3、10-40.1ml菌悬液，涂布法分离4、涂布：取0.1ml适当浓度的稀释液涂布于相应平板，每个稀释度做3个平行，每种菌需要做9块平板，及时标记，涂布后静置10分钟。5、培养将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于30℃培养箱中培养3-5d。6、

4、计数7、挑菌（纯化）将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进行观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离，培养，检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜涂片染色镜检是否是单一的微生物），如有杂菌需进一步纯化、分离。每毫升菌落形成单位＝同一稀释度的三次重复平均数×稀释倍数×5平板计数五、思考题1、记录利用稀释涂布法对土壤样品进行活菌计数的结果。平板中的CFU数重复123平均123平均123平均稀释度细菌10-410-510-6稀释度放线菌10-210-310-4稀释度真菌10-210-310-4每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌活细胞数＝（同一稀释度平板上菌落平均数×10×

5、稀释倍数）含菌样品克数