实验七血红蛋白和血型的测定

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1、人体血红蛋白和血型的测定实验（七）前言血红蛋白是红细胞的主要成分，除作为血液缓冲物质而发挥作用外，其功能是在肺部结合氧气，送到全身各组织并将组织中的二氧化碳送到肺部而呼出体外。血红蛋白分子是一种由亚铁血红素和珠蛋白结合而成的结合蛋白，由四个亚基构成，分别为两个α亚基和两个β亚基。血红蛋白的贮氧、运氧功能都是依靠血红素中的Fe2+与O2的配位结合，血红蛋白与氧结合是以协同效应方式进行的。除了运载氧与二氧化碳，血红蛋白还可以一氧化碳、氰离子结合，结合的方式也与氧完全一样，所不同的只是结合的牢固程度，一

2、氧化碳、氰离子一旦和血红蛋白结合就很难离开，这就是煤气中毒和氰化物中毒的原理。血红蛋白的含量与年龄、性别、营养状况和生活环境等因素有关。正常人与运动员Hb含量没有明显差异。初生儿170一220g/L婴儿160一200g/L成年女性110一150g/L成年男性120一160g/LHb的含量对运动员的运动能力影响很大，对耐力运动员的专项素质尤为重要，因此，定期测定Hb的含量有助于了解运动员的营养、对负荷的适应及身体机能水平等情况。实验目的1.掌握722分光光度计的原理及操作方法；2.了解比色法测定的原

3、理；3.掌握氰化高铁血红蛋白法的原理；4.熟悉移液管的使用及末梢采血的方法；5.掌握血红蛋白指标测定的意义及在运动实践中的应用。722分光光度计的原理光是一种电磁波，白光是由不同波长（400～760nm）的电磁波按一定比例组成的混合光，通过棱镜可分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种颜色相连续的可见光谱。在白光的照射下，物体所以呈现特定的颜色，是因为物体对不同波长的光有选择性地吸收所致。不同物质由于其分子结构不同，对不同波长的光线的吸收能力也不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。T=I/I0

4、其中：T透过率I0入射光强度I透射光强度A吸光度K吸收系数L溶液的光径长度C溶液的浓度分光光度分析技术的原理绿黄青橙白青蓝红蓝紫上图对应的两边互为互补光，如将互补的色光相混即产生白光。1.分光光度法是利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质及其含量的方法。2.光投射到物体上可被物体吸收或反射，如该物体是透明的则还有部分光可以透过。在白光照射下，物体所呈现特定的颜色，就是物体对不同波长的光有选择性的吸收所致。而溶液对某些波长的光的吸收极少而对其他波长的光吸收较多,则溶液就呈现这种吸收较少且透过较多光的颜色(

5、如：硫酸铜溶液对黄光吸收最强，对蓝光吸收最弱，故在白光的照射下该溶液呈现____)，说明任何有色溶液(或物体)都只对一种单色光有强烈的吸收能力,而对其它波长的光吸收能力较弱。比色分析法的基本原理比色分析法就是利用被测有色溶液吸收最强的单色光进行比色测定的，这样才能得到最满意的结果。当一束单色光通过某溶液时，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及液层厚度L成正比，即溶液浓度越大，液层越厚，吸光越多。朗伯—比尔定律：O.D=KLCO.D=溶液的吸光度A（光密度）L=光径（光通过溶液的距离，既比色杯的厚度）

6、C=样品浓度（mol/L）K=摩尔吸光系数。它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。其单位为L/mol·cm朗伯—比尔定律是比色分析方法的基本原理。(一)人体血红蛋白的测定实验原理Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi)，Hi与氰离子结合成氰化高铁血红蛋白(HiCN)，它在540nm有一吸收峰，测其光密度而得Hb的浓度。Hb+K3Fe(CN)б氧化HiHi+CN合成HiCN实验试剂和仪器试剂：(1)HiCN稀释液（有毒）（注：高铁氰化钾法测定血红蛋白比较准确、稳定，是目

7、前国家承认的标准，但试剂中有氰化物，剧毒，在实验进行过程中避免污染，实验完毕后注意药品的处理，不能乱倒）(2)75%的酒精仪器：722分光光度计、半自动生化分析仪、一次性采血装置、一次性采血管（20微升）、消毒棉球、5毫升试管、移液管测定管（一次性试管）氰化高铁血红蛋白稀释液5ml酒精消毒手指，并采取新鲜血液20µl混匀后放置至少10分钟540nm比色,空白调零读取测定管光密度值实验操作步骤⑴采血部位必须无炎症、水肿、充血及循环障碍。成人以无名指为宜。⑵被采血手指的手臂下垂1分钟左右，轻轻按摩

8、采血部位，使其自然充血，用75％酒精棉球消毒局部皮肤，待干。⑶紧控刺血部位，用采血针穿刺取血，动作应迅速，深度约2-3mm，轻微挤压，以血液能流出为宜。⑷干棉球擦去第一滴血，毛细吸管精确吸血20µl(5)采血完毕，用干棉球压住伤口，血止为止。(6)拭净毛细管外壁血迹，加入试管中，并将毛细吸血管重复吸洗，混匀采血的过程123456781光源2聚光透镜3色散棱镜4狭缝5比色杯6光门7光电管8检流计722分光光度计结构示意图722分光光度计的使用（1）开启电源，指示灯亮，仪器预热2