培养基性能测试指南

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1、惠山疾控作业指导书编号：HSCDC/ZN-06-2009培养基性能测试指南版本/修改次：1/0第1页共4页1.目的规范本中心微生物实验室对培养基性能测试的方法。2.适用范围本指南适用于固体和液体培养基的性能测试方法。3.职责3.1检验人员：按照本指南规定的方法对培养基性能进行测试。3.2科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基性能进行测试。4.培养基性能测试方法4.1概述通常使用半定量和定性测试方法就能满足实验室对培养基性能测试的要求；评价新的培养基或新的供应商的产品时，应采用定量方法。本指南中所提到的接种环是直径为3mm的接种环。4.2测试菌株4.2.1工作菌株的使用及管理工作菌株的

2、使用及管理详见作业指导书《菌种管理工作指南》HSCDC/ZN-05-2009。4.2.2工作菌株的制备工作菌株是将标准储备菌株接种到非选择性肉汤（如营养肉汤）中所制备的处于稳定生长期的纯菌株。4.2.2.1工作菌株定量菌液的制备4.2.2.1.1标准储备菌株接种到营养肉汤中培养18～24小时，用生理盐水配成0.5麦氏单位，再用生理盐水稀释至实验所需的稀释度。4.2.2.1.20.5麦氏比浊管对应的菌液浓度约为108/mL，以下是几种常用细菌的比浊标准（0.5麦氏单位）。肺炎双球菌3×108/mL痢疾志贺氏菌8×108/mL大肠埃希氏菌8×108/mL福氏志贺氏菌8×108/mL铜绿假单胞

3、菌10×108/mL宋内氏志贺氏菌8×108/mL甲型副伤寒沙门氏菌10×108/mL甲型溶血性链球菌2×108/mL乙型副伤寒沙门氏菌10×108/mL霍乱弧菌18×108/mL伤寒沙门氏菌10×108/mLEL-TorO1群霍乱弧菌18×108/mL4.2.2.2麦氏比浊管4.2.2.2.10.5麦氏比浊管的配制0.5mLBaCl2（1.175%,w/v）＋99.5mLH2SO4（1%,v/v）充分混匀后，每管分装4～6ml,封口后置室温暗处保存。也可购买使用麦氏标准比浊管。4.2.2.2.20.5麦氏比浊管的校准用光径为1cm比色杯在分光光度计上以波长625nm处测其吸光度，0.5

4、个麦氏单位的比浊管吸光度在0.08～0.1之间为合格。4.2.2.2.3麦氏比浊管的使用（1）使用前，将比浊管摇匀，目测其外观浊度应均匀一致。若有大颗粒出现，此标准管应更换。每月需更换比浊管或复验比浊管的浊度。（2）无菌操作将待用的肉汤培养物加到与标准管相同直径（大小）的无菌试管中。（3）以无菌操作向被测定试管加入无菌生理盐水（NaCl），直到浓度与所要求的麦氏惠山疾控作业指导书编号：HSCDC/ZN-06-2009培养基性能测试指南版本/修改次：1/0第2页共4页比浊管的浓度相同（找张白纸，打上平行直线，然后观察比较两管的浊度）。4.2.2.3生长率测试用工作菌株目标菌的定量、半定量和

5、生长率试验常用每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。4.2.2.4选择性测试用工作菌株培养基选择性试验是将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种到平板或试管上。4.2.2.5培养条件按相关标准或要求规定的条件对接种后的培养基进行培养。4.3固体培养基测试方法4.3.1定量测试方法（Miles-Misra法）4.3.1.1按4.2.2的方法制备工作菌株菌液。4.3.1.2测试平板和参照平板划分为4个区域并标记（也可不划分四个区域）。4.3.1.3从最高稀释度开始，分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域4.3.1.4将稀释液用L-

6、玻璃棒涂满整个1/4区域，按标准规定的培养条件培养平板。4.3.1.5对易计数的区域计数，按公式计算结果PR和SF生长率PR的计算：PR=NS/NONS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。N0：从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu）。选择因子SF的计算：SF=DO-DSDO：能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度。DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度。非选择性培养培养基上目标菌的生长率最低应为0.7;选择性培养培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；非目标菌在选择性培养培养基上的SF至少为2。4.3.2半定量测试方法（改进的平

7、板划线法）该方法适用于固体和液体培养基的性能测试，但仅能作为固体培养基的补充测试。4.3.2.1按4.2.2的方法制备工作菌株菌液。4.3.2.2用3mm接种环按图1划线平板，A、B、C部分用接种环按0.5cm的间隔各划4条平行线，最后在D区内划一条连续的曲线。划线时可将模板放在平板下面。4.3.2.3按标准规定的培养条件培养平板。4.3.2.4计算生长指数G：每条有菌落生长的划线记作1分。每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分。没有