外植体的选择和灭菌

《外植体的选择和灭菌》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、复习题：培养基的成分包括哪几类？各有何作用？在培养基成分中什么决定着外植体发育方向？抗生素的作用是什么？配制MS培养基时，琼脂和蔗糖的加入量一般为多少？？第一节外植体的选择第二节外植体的灭菌方法第三节污染原因和预防措施第三章外植体的选择和灭菌第一节外植体的选择1外植体部位2取材季节3器官的生理状态和发育年龄4选取适宜的大小1外植体部位植物体的各个部位，如茎尖、茎段、皮层及维管组织、髓细胞、表皮、块茎的贮藏薄壁细胞、花瓣、根、叶、子叶、鳞茎、胚珠和花药等。不同种类的植物以及同一植物的不同器官对诱导条件反应不一致的。大多

2、数植物来说，茎尖是较好的部位，其形态已基本建成，生长速度快，遗传性稳定，是获得无病毒苗的重要途径。外植体选择的原则培养材料的来源是否保证是否会引起不良变异。叶片的来源最有保证，许多植物的组织培养以叶片为外植体。对一些培养较困难的植物，可以通过子叶或下胚轴来建立其组织培养再生体系。2取材季节在生长开始的季节取材，若在生长末期或已进入休眠时取样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。3器官的生理状态和发育年龄植物上部器官的生长时间虽短，其生理年龄却较老，更接近发育上的成熟，越容易形成花器官。而越向基部，则生理年龄越小。下部

3、组织越易形成营养器官，上部组织易形成花器官。通常年幼组织比年老组织有较高的形态发生能力，容易培养，有较大的再生能力。4选取适宜的大小材料太大易污染；材料太小，难于成活。0.5cm--1.0cm。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小第三章外植体的选择和灭菌第一节外植体的选择第二节外植体的灭菌方法第三节污染原因和预防措施1外植体的灭菌方法预处理：先对植物组织修整，去掉不需要的部分，流水中冲洗干净。预处理的植物材料的灭菌：原则：充分灭菌，但不伤外植体不同的外植体，灭菌的要求也不一样2常用灭菌药剂的使用和效果灭菌剂使用浓

4、度（%）清除的难易消毒时间（min）效果次氯酸钠10-30易5—30很好次氯酸钙2易5—30很好漂白粉饱和浓度易5—30很好氯化汞0.01—1较难2—10最好酒精70—75易0.2—2好过氧化氢10—12最易5—15好溴水1—2易2—10很好硝酸银1较难5—30好抗菌素4—50mg/L中30—60较好常规的表面灭菌处理方法①把材料放进70%的酒精中约30s。②用0.1%的升汞（HgCl2）中浸泡5-10min。或用10%的漂白粉上清液中浸10min～15min。③无菌蒸馏水冲洗3～5次。④灭菌时进行搅动，使植物材料与

5、灭菌剂有良好的接触。⑤在灭菌剂里滴入数滴0.1%的Tween20（吐温）或Tween80湿润剂，则灭菌效果更好。1）表面消毒剂对植物组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。2）与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。3）若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。4）HgCl2效果最好，但对实验材料的危害最大，要用水冲洗至少5次。消毒注意事项第三章外植体的选择和灭菌第一节外植体的选

6、择第二节外植体的灭菌方法第三节污染原因和预防措施第三节　污染原因和预防措施1、污染的原因污染——是指在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。1.1污染的原因：从病源菌方面：主要有细菌及真菌两大类；从污染的途径：外植体带菌培养基器皿灭菌不彻底操作人员未遵守操作规程等引起的。1.2细菌污染的特点：菌斑呈粘液状物，而且在接种后1～2天即可发现。原因：材料带菌培养基灭菌不彻底操作人员未遵守操作规程因此接种人员的手应经常用70%酒精精擦净，镊子和接种针在使用前必须在火焰上烧红。1.3真菌污染的特点：污染部

7、分长有不同颜色的霉菌，在接种后3～10天才能发现。原因：周围环境不清洁超净工作台的过滤装置失效培养用器皿的口径过大等为了减少损失，提高工作效率，必须在每个操作环节注意防止污染的发生。污染后的措施发现污染的材料应及时处理，否则将导致培养室环境污染。对一些特别宝贵的材料，可以取出再次进行更严格的灭菌，然后接入新鲜的培养基中重新培养。要处理的污染培养瓶最好在打开瓶盖前，先集中进行高压灭菌，再清除污染物，然后洗净备用。2污染的防治措施2.1防止材料带菌的措施2.2外植体的灭菌2.3玻璃器皿的灭菌2.4金属器械的灭菌2.5布质

8、制品的灭菌2.6无菌操作室的灭菌2.7操作2.1防止材料带菌的措施（1）用茎尖作外植体时，可在室内或无菌条件下对枝条先进行预培养。枝条插入无糖的营养液或自来水，以新抽嫩枝条作为外植体；或暗培养，待抽出徒长的黄化枝条时采枝接种。（2）选择合适的时间去田间采取外植体避免阴雨天去田间采取外植体。在晴天采取外植体时，下午采取的外植体要比早晨采的污染少，