《基因工程操作程序》PPT课件

《《基因工程操作程序》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、（补充知识）基因的结构1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。②转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。③转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。原核细胞的基因结构能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。②有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的是

2、位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。启动子2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子内含子：外显子：真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码序列：包括非编码区和内含子1.2基因工程的基本操作程序为什么要获得目的基因为什么要把目的基因与载体结合受体细胞是

3、指什么为什么要进行检测基因文库的构建模式图通过对受体菌的培养而储存基因www.jkzyw.com由mRNA反转录形成cDNAmRNADNA单链DNA单链RNA–DNA杂交分子RNA–DNA杂交分子单链DNA单链DNA双链DNA逆转录使RNA降解复制核酸酶H??形成氢键第一步：获取目的基因方法：1.从基因文库中获取目的基因。2.利用PCR技术合成DNAPCR:聚合酶链式反应.是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的.前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物。PCR原理图PCR的过程（1）

4、以DNA片段作模板，在90℃高温下，分开成为单链DNA。（2）以DNA小段寡聚核苷酸做引物，在50℃的温度下，找到可以配对的正链和负链，形成互补结合（3）在70℃高温下，合成一条与模板DNA单链（正链或负链）互补结合的DNA新链。（4）以上三个步骤周而复始，即反应体系的温度从90oC-50oC-75oC，目的基因的量不断增加反应体系中经历：变性——淬火——合成——重复。结果：目的基因的量成指数形式扩增（2n)高温的作用是？引物是怎样获得的？四种脱氧核苷三磷酸（4XdNTP)酶高温DNA聚合酶（Ta

5、q酶），原料第二步：基因表达载体的构建核心目的基因与载体结合成为重组基因需要哪两种工具总结：表达载体需由哪几部分组成复制原点启动子目的基因终止子标记基因它们的作用是？www.jkzyw.com