PMSF及常用试剂的配制方法

《PMSF及常用试剂的配制方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、PMSF英文全称：Phenylmethanesulfonylfluoride中文名称：苯甲基磺酰氟分子式：C7H7FO2S分子量：174.19CAS号：[329-98-6]PubChem号：4784结构示意图：分类：OrganicChemicalsSulfurCompoundsSulfonesPhenylmethylsulfonylFluoride使用介绍：1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；2）10mg/ml溶于异丙醇（或无水乙醇）中；3）在室温可保存一年,一般保存在-20度或4度.；4）工作浓度：17~174ug/ml（0.1~1

2、mM），储存液浓度为100或200mM；5）在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h,补加一次。（见水分解，使用前加入）【注意事项】1.PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。2.PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。3.PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0

3、时，20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。PMSF的储存：2-8℃可以存放数月之久。欲长期保存，可冻存在-20℃例:100mMPMSF称量0.174gPMSF(针状结晶固体)溶于10ml异丙醇,震荡混匀，保存在-20度或４度.　工作浓度我一般用1mM,1:100(V/V)加入即可.样品处理超过1h,补加一次.(PMSF剧毒,为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作．PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应

4、立即用大量水冲洗之。）PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。常用试剂的配制：1、30%丙烯酰胺(1)配制方法：将29G丙烯酰胺和1gN，N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加水至终体积为1

5、00ml，用Nalgene滤器（0.45um孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置之不理棕色瓶中保存于室温。（2）说明：小心丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具螺积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman1号滤纸以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸。2、10%过滤酸铵（

6、1）配制方法：把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。3、1mol/L氯化钙（1）配制方法：在20ml纯水中（Milli-Ce水或相当级别的水）溶解54gCacl2?6H2O用0.22um滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。（2）说明：制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用纯水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45um孔径）过滤除菌，然后聚冷至0℃。4、1mol/L二硫苏糖醇（DTT）（1）配制方法：用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。（2）说明：DTT或

7、含有DTT的溶液不能进行高压处理。5、0.5mol/LEDTA（pH8.0）（1）配制方法：在800ml水中加入186.1g=水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20gNaoh颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。（2）说明：EDTA二钠盐需加入NaoH将溶液的pH值调至接近8.0时，才能完全溶解。回到页首6、10mg/ml溴化乙锭（1）配制方法：在100ml水中加入1g溴化乙