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时间:2019-07-02
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1、常见的酶类药物及治疗作用常见酶类药物1、L-天门冬酰胺酶工艺路线L-天门冬酰胺酶工艺说明①菌种培养大肠杆菌37℃培养24h普通牛肉培养基;②种子培养16%玉米浆,接种量1~1.5%,37℃,通气搅拌培养4~8h;③发酵罐培养玉米浆培养基,接种量8%,37℃通气搅拌培养6~8h,离心分离发酵液,得菌体,加2倍量丙酮搅拌,压滤,滤饼过筛,自然风干成菌体干粉;④提取、沉淀、热处理 每千克菌体干粉加入0.01mol/LpH8的硼酸缓冲液10L37℃搅拌1.5h,30℃8mol/L醋酸调节pH4.2~4.4,压滤,滤液加入2倍体积
2、的丙酮,放置3~4h过滤,收集沉淀,自然风干,得干粗酶。取粗制酶,加入0·3%甘氨酸,调节pH8.8搅拌1.5h离心,上清液60℃30min热处理。上清液加2倍体积的丙酮,析出沉淀,离心,收集酶沉淀,0.01mol/L,pH8磷酸缓冲液溶解,离心得上清酶溶液。⑤精制、冻干调节pH8.8离心弃去沉淀,清液再调pH7.7加入50%聚乙二醇,浓度达到16%。2~5℃放置4~5天,离心得沉淀。蒸馏水溶解加4倍量的丙酮沉淀,同法反复1次,pH6.4,0.05mol/L磷酸缓冲液溶解,50%聚乙二醇处理1次,即得无热原的L一天门冬酸
3、胺酶。溶于0.8mol/L磷酸缓冲液,在无菌条件下用6号垂熔漏斗过滤,分装,冷冻干燥制得注射用L一天门冬酸胺酶成品,每I支1万或2万单位。二、细胞色素C生产工艺临床上主要用于组织缺氧的急救和辅助治疗药物,适用于治疗脑、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切症状。工艺过程①绞碎、提取、压滤取新鲜或冷冻猪心,去血块、脂肪和肌健等,绞肉机中绞碎。称取心肌碎肉,加1.5倍量蒸馏水搅拌均匀,用硫酸调pH4左右,常温搅拌提取压滤,滤液用氨水调节pH6.2,离心得提取液。心渣再加等量蒸馏水同上法重复提取1次,合并两次提取液。②中和、吸附、洗脱
4、提取液加氨水中和至pH7.5,在冰箱中静止沉淀杂蛋白,吸取上层清液,每升提取液加入10g人造沸石,搅拌吸附40min,静置倾去上层清液。收集吸附细胞色素C的人造沸石,用蒸馏水和氯化钠溶液反复洗涤,然后装柱,用25%硫酸氨溶液洗脱,得洗脱液。③盐析、浓缩、透析洗脱液加入固体硫酸镀达到45%饱和度,使杂蛋白析出,过滤。收集透明滤液,缓缓加入20%三氯醋酸,边加边搅拌使细胞色素C沉淀析出,离心收集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水,装入透析袋中,透析至无硫酸根为止,过滤得细胞色素C粗品溶液。④吸附、洗脱、透析粗品溶液通过处理好的Ambe
5、riteIRC-50(NH4+)树脂柱吸附,然后将树脂移入大烧杯中,水洗至澄清为止,再分别上柱,用0·6mol/L磷酸氢二钠与0.4mol/L氯化钠混合液洗脱,洗脱液用蒸馏水透析去氯离子,得细胞色素C精品溶液。⑤制剂取含相当于1.5g的细胞色素C精品液,加200mg亚硫酸氢钠,搅拌溶解再加双甘肽1.5g混合均匀,用氢氧化钠调节pH6.4左右,加注射用水100ml,过滤除热原,6号垂溶漏斗过滤,测含量,灌注,冷冻干燥,即得每支含15mg细胞色素C的制剂。
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