医学超级全核医学第六章

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1、第六章体外分析皖南医学院弋矶山医院陶绍能1定义体外分析以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。2放射分析方法或其派生的相关技术在体外进行机体内物质种类和含量的分析测定。测定对象是患者血清或其他体液样品内的激素、其它生物活性物质和药物浓度等。3体外放射分析技术是结合了放射性核素的高灵敏度和特异性结合反应的高特异性的一种超微量分析技术，具有灵敏度高、特异性强、精密度好、样品用量少、放射线不引入人体内、应用面广、方法简便等优点。是对多种

2、疾病诊治和研究的重要方法之一。1959年由美国Berson&Yalow建立了本方法，Yalow为此在1977年获得诺贝尔医学与生理学奖4体外分析技术建立的基础:以配体和结合体的特异性结合反应为共同的生物学基础以结合反应动力学规律作为共同的方法学基础以放射性等的测量技术作为共同的定量手段5生物学基础：特异性结合反应配体-结合体抗原-抗体的免疫结合反应；配基-受体的结合反应；底物-催化酶之间的酶促反应；激素-激素结合球蛋白的结合反应6方法学基础：结合反应动力学规律遵守可逆反应的质量作用定律：k1,v1[L]+[R][RL]k2,v2

3、7定量手段(标记配体作为示踪剂)放射性测量技术酶定量技术化学发光定量技术荧光定量技术8体外分析技术体外放射分析体外非放射分析放射性竞争结合分析放射性非竞争结合分析放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)免疫放射分析酶免疫分析化学发光免疫分析荧光免疫分析(immunoradiometricassay,IRMA)(EIA)(CLIA)(FIA)分类:9放射免疫分析radioimmunoassay,RIA10放射免疫分析法是Yalow和Berson于1959年在研究胰岛素的时候创立的一种体外放射分析技术。结合了放射性核

4、素的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。Dr.Yalow11一、RIA的基本原理（一）竞争抑制结合反应：放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。Ag和*AgAb间呈负相关函数关系12基本原理Ag-Ab+Ag*AgAbAg++*Ag-Ab+*Ag(B)(F)*Ag与Ag免疫活性相同*Ag＋Ag>AbAg=*Ag,AgAb=*AgAbAg>*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)Ag<*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)13Ag*AgAb*AgAbAgA

5、b*Ag+++++++++++++++++++++Ag14（二）剂量反应曲线：标准曲线标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。15标准曲线的绘制方法用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F；分别测量B和F的放射性；用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得

6、到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。16Ag2550100200400800*AgAb分离B、FB%=B/(B+F)F%=F/(B+F)R=B/FB1%B2%B3%B4%B5%B6%123456浓度17B%标准曲线18未知样品的测量在同等条件下，用待测抗原与一定量的标记抗原与限量特异性抗体发生反应，并用同样的方法分离待测抗原的B和F，测量其放射性，计算出B/F，在剂量反应曲线上就可以查出对应的抗原浓度。19Ag2550100200400800*AgAb分离B、FB1%B2%B3%B4%B5%B6%1

7、23456B%？20B%F%B/FCalibrationCurve6021在实际的操作中，一般要设立：最大结合管（Bo）：标准抗原的量为0，只有标记抗原和特异性抗体时，标记抗原与抗体充分反应后分离B和F，所测得的B的放射性为Bo。这是没有标准抗原与之竞争时，标记抗原和抗体的结合达最大值。非特异结合管（NSB）：标记抗原除了要和特异性抗体结合以外，还要和一些杂质蛋白或容器的管壁等结合，对我们的分析结果产生影响。NSB管是用蒸馏水代替特异性抗体，在相同条件下反应后测得的放射性。22总放射性管（T）：反应后不分离就直接测得的放射性就是

8、总放射性。表示标记抗原抗体复合物和游离的标记抗原的总放射性。标准管（B1~Bn）：放有不同浓度的标准抗原，再加入相同量的标记抗原和特异抗体。一般在反应后分离出沉淀，测定沉淀的放射性作为B。样品管（Bx）：用同剂量的样品代替标准管中的标准抗原，在相同条件下反应和分