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1、黄酮标准曲线绘制的实验报告1.总黄酮的测定1.1实验仪器电子天平AR2140;紫外可见分光光度计UV2754;型数控超声波清洗器KQ3200DB;超级恒温槽;RotavaporR200旋转蒸发仪;FD21C250冷冻干燥机21.2试剂及药品芦丁标准品硝酸铝国产分析纯（配成5%）亚硝酸钠国产分析纯（配成10%）氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L）95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇50%乙醇）DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基）Vc（Ascrobicacid，维生素C，抗坏血酸）没食子酸对照品：基准纯。大青叶子采摘于
2、海南大学东坡湖畔1.3实验步骤：1.3.1准备工作及波长的确定样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备精密称取120℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,分别置于10mL容量瓶中，并定容至刻度线。得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/
3、ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液0.3mL摇匀,放置6min,加1mol/L氢氧化钠溶液4mL,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。（以试剂空白做参比）以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A的线性回归方程以及相关系数R2。序号浓度（ug/ml）吸光度1002150.1803300.3494450.5465600.7276750.8847
4、901.063表1-1：芦丁标准曲线测定数据图1-2：芦丁标准曲线1.3.5样品的测试根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。取黄酮提取液，取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液0.3mL摇匀,放置6min,加1mol氢氧化钠溶液4mL,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比）,三次结果取平均值。
5、经换算后得样品中总黄酮含量。样品总黄酮含量(mg/g)=X*n*V1/(V*W)式中：X—测出的浓度，mg/mL;（直接代入，不用换算。）n—稀释倍数，量纲为1;VI—样液总体积，mL;V—测定时取样体积，mL;W—样品质量，g。2.总分含量的测定2.1实验仪器ALZO4型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;DELA犯O型pH计:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;723可见分光光度计:上海菩华科技仪器有限公司;DK一512型电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司;容量瓶(250mL，10OmL，25mL)、比色管管(10mL);烧杯、移液管、吸耳球。2.2试剂及药品没食子酸对照
6、品：基准纯，购于上海分析试剂厂，置50℃真空干燥箱真空中干燥4h。乙醇为工业级，蒸馏水，其他试剂均为分析纯。2.3Folin—Ciocalteu比色法测定总酚酸含量3.3.1Folin—Ciocalteu试剂的配制称取20g钨酸钠和5g钼酸钠于圆底烧瓶中，用140ml蒸馏水溶解，加入10ml85％的磷酸溶液和20ml浓盐酸，文火回流10h，然后加入3g硫酸锂及15ml双氧水，加热沸腾15min至亮黄色，不得带微蓝和绿色。冷却，移入250ml容量瓶中，定容，贮于棕色瓶中，4℃冰箱保存。2.3.2对照品溶液制备准确称取15．00mg干燥的没食子酸，加蒸馏水适量，超声溶解，放冷，以蒸馏水定容至
7、50ml，制成0.3mg/mL没食子酸的溶液，作为对照品溶液。将0.3mg/mL的没食子酸标准溶液分别配制成0.0mg/mL，0.03mg/mL，0.06mg/mL，0.09mg/mL，0.12mg/mL，0.15mg/mL、0.18mg/mL、0.21mg/mL的溶液，分别取1mL置于10mL的容量瓶中，加入2ml福林试剂，充分摇匀，加入0．75ml7.5％碳酸钠溶液．混匀，以蒸馏水稀释至刻度。振荡一下，静置2h(Guo&Wei,
