微生物遗传育种学

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1、第二章基因突变与损伤DNA修复5.化学诱变剂：干扰碱基合成的化学诱变剂碱基类似物导致的碱基错配碱基修饰引起的化学突变：亚硝酸引起的氧化脱氨反应；羟胺的致突变作用；烷化剂；嵌合剂和移码突变。6.SOS修复机制：SOS基因都与LexA蛋白结合，阻遏作用，UA照射后产生大量嘧啶二聚体-产生单链DNA，RecA蛋白与单链结合，激活蛋白酶使LexA阻遏蛋白自我切割，SOS得以表达，高效切除与重组修复。渡过难关后···10.筛选点突变株实验。合成一段oligo-dnt（包含突变位点）作为引物；从单链MB(t)链为模板，加入rlenao酶，以dntp为原料合成核苷酸链；加入T4DNA连接酶，然后

2、转化到大肠杆菌中，产生MB噬菌斑；以突变的oligo-dnt为引物进行杂交筛选，噬菌体侵染宿主菌的杂交法将突变株和未突变分开；得到突变核苷酸。第三章病毒遗传分析2.λ噬菌体基本结构及重要基因功能。基因组结构：粘性末端，寄主细胞内环化，cos位点；噬菌斑形成必须基因：7个head，11个tail，复制所需基因O、P，裂解释放所需基因S.R，正调控基因NQ。噬菌斑非必需基因：附着区att,专一重组必须基因：int,xis，溶源所需CI、CII、CIII，重组所需exo、red.3.转录与调控进入细胞后两个末端连接呈环状。前早期：PL、PR开始，位于CI两侧，转录终止于tL1、tR1，产

3、生N和cro。后早期：N结合在右转录nutR区，然后再结合到RNA聚合酶上，中和终止因子ρ，使通过tR1.tR2，转录出复制基因OP和调节基因Q，cro,CII,CIII.向左类似，通过终止子tL1，转录整合酶int切割酶xis重组基因gam。晚期转录：Q抗中止，PR’为晚期基因启动子。第四章质粒1.遗传表型：致育性；抗药性；产生抗生素和细菌素；编码毒素；讲解质粒；致病性；共生质粒；隐蔽质粒。2.常用质粒分离纯化方法碱变性法：培养与收集—溶菌—碱变性处理（SDS与NaOH）--离心分离琼脂糖凝胶电泳，氯化铯-溴化乙锭密度梯度离心，电镜观察。9.三亲杂交：PSUP204（可移动）,R

4、P4（自主移动），HB101.10.质粒所需基本原件：重复序列，复制起点，多克隆位点，标记基因，启动子。第五章酵母菌遗传1.酵母菌基因组特点：16条染色体，1532kb,没有操作子，有间隔区和内含子。70%是编码蛋白的ORF，还有编码RNA基因，52个反转座子。3.2um质粒：隐蔽质粒，环状周长2um6kb双链DNA，只携带复制与重组有关的4个蛋白质基因—REP1REP2REP3FIL,两个600bp反向重复序列IR，IR上各有一个FRT（专一重组位点），重组产生两个湖边异构体AB。4.嗜杀质粒：L,M同时存在嗜杀----具有独立复制能力的双链线性RNA。5.酵母菌启动子元件：上游

5、激活序列UAS10~30bp，基因转录所需；TATA位于mRNA转录起始位点40~120bp；转录起始位点。6.接合型如何转化：MAT暗盒，两侧同源区沉默暗盒HML,HMR。HML-α暗盒,HMR-a暗盒。7.酵母人工载体主要部件：着丝粒--CEN4自主复制序列—ARS1端粒--TEL多克隆位点标记基因—TRP1/URA3分别为色氨酸和尿嘧啶营养缺陷性的野生型等位基因，可用作相应营养缺陷性酵母的选择标记复制起始位点--ori抗性基因—Ampr。8.酵母菌双杂交系统：GAL4含有两个独立结构域，DNA结合区—DNA-BD，转录激活区—DNA-AD，BD能够识别和结合UAS，AD能够同

6、RNA聚合酶作用启动UAS下游转录，两个分开时不能激活。X、Y待测蛋白，X-BD诱饵蛋白/Y-AD靶蛋白。第六章原核微生物基因表达调控3.乳糖操纵子调控。阻遏蛋白负调控，CAP正调控。乳糖操纵子结构基因LacZ、Y、A顺序排列，共用一个启动子P，启动子与结构基因之间是操纵基因O，启动子上游是调节基因LacI,有自己启动子终止子，产物阻遏蛋白与操纵基因结合阻止转录。负调控：阻遏蛋白受乳糖和IPTG等小分子诱导物影响。有乳糖时，被少量β-半乳糖甘梅变成异乳糖，作为诱导物与阻遏蛋白结合使之变性失活，从而进行转录翻译出β-半乳糖甘梅、半乳糖苷透性酶、β-半乳糖甘转乙酰酶。代谢完毕后，阻遏重

7、新结合。正调控：乳糖启动子含有CAP位点，cap基因产生CAP调节蛋白，CAP与CAMP结合才能激活转录。有两种方式：作用于DNA，使弯曲更易结合RNA聚合酶，改变DNA二级机构，利于解链；作用于RNA聚合酶中σ亚基羧基端，提高转录水平。若有葡萄糖，则产生大量ATP，CAMP下降，无法形成CAP-CAMP聚合物，无法转录。4.色氨酸操纵子结构特点162个碱基组成142个碱基处存在多聚的U，为弱化序列（终止信号）27-71个碱基为前导序列，编码14个氨基酸组成的肽链1-