尿蛋白电泳操作规程

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1、尿蛋白电泳操作规程尿蛋白电泳操作规程一．项目名称尿蛋白电泳（HYDRAGELPROTEINURIE）二．检验方法名称SDS－琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理在含有多量的阴离子去垢剂十二烷基磺酸钠（SDS）液体中，蛋白质可与其连接，形成SDS—蛋白质复合物。这种复合物蛋白本身的构造已经破坏，他们都表现出相同的构造和相同的负电荷。当这种SDS—蛋白质复合物在具有适当筛选功能的介质中电泳时，如在含高浓度琼脂糖的HYDRAGEL5PROTEINURIE凝胶上电泳时，蛋白质按它们的分子量大小进行分离。在HYDRAGEL5PROTEINURIE凝胶上能清楚分离来源于肾小管（分子量＜65-7

2、0Kda)还是来源于肾小球（分子量＞65-70KDa）的蛋白质，因此尿蛋白不仅能被检测到，而且能对蛋白来源进行分类（肾小球，肾小管性和混合性）。四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（movingboundaryeectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zoneelecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。五．仪器（一）型号：SEBIAHYDRASYS(PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约14个样本/小时2．所需样本量：5ul3．检验时间：约50分钟4．重复性：有良好的

3、批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL5PROTEINURIE试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：50测试（3）货号：PN41152．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Packfor10×100ml3尿蛋白电泳操作规程（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Packfor10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠（一）配套品尿蛋白质控（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Packfor5×1

4、ml（3）货号：PN4781二．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。㈡打开密闭的凝胶片盒，取出凝胶片并放在关闭的凝胶片盒上，用滤纸条轻柔、迅速地吸去凝胶片槽孔中的多余水分，在每一槽孔内加入5ul已处理的尿样本，注意不能有气泡，在每次加样前应擦拭移液器尖端，在整个加样过程千万不可触及槽孔的底部。㈢选择«PROTEINURIA1*5»程序进行一个凝胶片的电泳，或者«PROTEINURIA2*5»程序进行两个凝胶片的电泳。㈣取出缓冲条固定在电极架上，当放一个凝胶片时将120ul蒸馏水或去离子水加在电泳舱的温控板上偏下中间处，或者在放两个凝胶片时，在偏下的左半侧和右半侧各加100ul的蒸馏水或

5、去离子水；将凝胶片底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。㈤自然放下支架，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。㈥电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束，打开电泳盖，将加样梳和缓冲条丢弃，取出已烘干的胶片，用湿纸巾擦拭电极和温控板，将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中，在检查染色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml脱色液，保存液容器内是否有300ml保存液以及是否排空了废液瓶后，选择«Proteinuria»染色程序并按“start”键开始染色。㈦在染色、脱色以及

6、干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架并取下已干燥的凝胶片，可用湿软的纸擦干凝胶片背面的塑料支持膜。㈧关机。三．参考范围本试验是定性结果。四．临床意义㈠生理性蛋白尿：尿蛋白含量是很低的，通常低于120mg/24h，男女之间无明显差异。主要是白蛋白，有时可有极微量的转铁蛋白或免疫球蛋白，当尿蛋白＞120mg/24h时，应考虑为病理性蛋白。对阳性的尿蛋白（＞120mg/24h）应注意随访。㈡肾小球型蛋白尿：尿蛋白其特征为：分子量＞65-70KDa（如白蛋白、转铁蛋白和IgG），电泳条带显示位置在样本加样点与白蛋白部分之间，白蛋白是其主要组分。3尿蛋白电泳操作规程㈢肾小管

7、型蛋白尿：其蛋白特征为：分子量＜65-70KDa，电泳条带位于白蛋白和凝胶片阳极端之间。如α1－微球蛋白，游离轻链单体，β2－微球蛋白，视黄醇结合蛋白(RBP)，溶菌酶，单纯性肾小管型蛋白尿中白蛋白只占少部分。㈣混合型蛋白尿：其蛋白特征为肾小管及肾小球的蛋白同时并存。通过此方法我们可以很容易地对肾脏疾病作早期诊断/鉴别诊断及分型、治疗效果的观察、肾活检（属创伤性诊断）前的筛查、甚至代替肾活检。一．标本要求㈠取24小时的新鲜尿液，必要时样品在2℃～8℃可保存一周。冷冻的样本可保存一个月。冷冻样