《色谱基础理论》PPT课件

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1、色谱基础理论林直宏Email：Linzh@cnfuli.com.cn目录二气相色谱仪的结构与检测器原理一色谱法的基本理论三高效气相色谱仪的结构与原理一、色谱法的基本理论80%-85%的有机化合物色谱法的起源20世纪初，俄国科学家茨维（M.S.Tswett）提出经典液相色谱法后，色谱分析法取得了迅速的发展，分离基本模型ABCD流动相3种组分同时进入色谱柱3种组分开始在色谱柱中分离3种组分在色谱柱中基本达到分离3种组分在色谱柱中完全达到分离色谱法，即利用组分在体系中固定相与流动相的分配差异，将混合物组分进行分离和测定的方法。色谱分类GC进样方式：样品转化为液体流

2、动相：惰性气体，不予组分发生反应，黏度10-5Pa·s，输出压力0.1～1.0MPa。固定相：1、分离机理：吸附、分配、络合、手性作用2、色谱柱：填充（粒度0.1-0.5mm，柱内径1-4mm，柱长1-4m，柱效102-103；毛细（内径0.1-0.5mm，柱长10-100m，柱效103-104）；柱温室温-420℃。检测器：FID、TCD、ECD、FPD、NPD应用范围：低分子量、低沸点有机化合物；永久气体。LC进样方式：样品需为液体流动相：离子型、极性、弱极性或非极性溶液，可与被分析组分发生反应，黏度10-3Pa·s，输出压力45MPa。固定相：1、分离

3、机理：吸附、分配、筛析、离子交换、亲和、手性作用。2、色谱柱：填充（粒度5-10um，柱内径3-6mm，柱长10-25cm，柱效104；柱温室温-50℃。检测器：UVD、DAD、FD（荧光）、ECD（电导）、RID、ELSD应用范围：低分子量、部分低沸点、高沸点、高分子量有机化合物；离子型化合物；生物活性物质。基本术语色谱图检测信号和时间的关系图不同的色谱峰对应相应的组分可以得到相应组分的保留时间和峰面积信息。保留时间–定性分析峰面积–定量分析基本术语保留时间（Retentiontime)：组份从进样到出现最大值所需要的时间，tR死时间(deadtime)

4、:不被固定相滞留的组份，从进样到出峰最大值所需要的时间，t0峰高（PeakHeigh)从峰最大值到峰底的距离,峰面积（PeakArea)峰与峰底之间的面积出峰异常-无峰或峰很小GCA.色谱柱连接是否正确B.系统是否有漏C.检测器是否工作开启，如FID点火了吗？FID高压静电正常吗？TCD加电流了吗D.柱中是否有载气E.样品是否降解、沉淀LCA.色谱柱连接是否正确B.系统是否有漏C.检测器是否正常，如UVD的是否能力异常，R/S是否正常；氘灯是否点亮D.流动相组分、纯度、配比是否正常E.样品是否降解、沉淀基线(baseline)基线(baseline)—经流动

5、相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。噪音(noise)—基线信号的波动。流动相波动、电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、色谱柱被污染所致。漂移(drift)—基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。基线异常-噪声、漂移变大或不规则GC流动相：载气不纯气源输出不稳气路有漏气检测器被污染色谱柱被污染LC流动相：流动相非色谱纯，使用试剂、水或药品不纯，或被污染；有气泡泵输液不稳检测器故障，如流过池漏液色谱柱被污染分离度（Resolu

6、tion)当R=1时，有5％的重叠；当R=1.5时，分离程度为99.7%，可视为基线分离毛细管色谱柱比填充柱有更高的分辨率。两个相邻峰的分离程度。以两个组份保留值之差与其平均半峰宽值的比来表示：峰的形状理想的峰型是高斯曲线.分子的理论统计学分布拖尾因子(tailingfactor，T)用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetryfactor)或不对称因子(asymmetryfactor)。《中国药典》规定T应为0.95~1.05。T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。峰型异常-前伸峰GC峰伸舌多为色谱柱过载，减小进样量，使用大容量柱子提高O

7、VEN，INJ温度；进样技巧提高。色谱柱的连接LC死体积太大样品溶液的配比极性与流动相的极性相差太大。减少进样量；保护柱或柱失效峰型异常-峰拖尾GC溶剂/固定相极性不相匹配色谱柱安装不正确同时有两个峰流出分流比太小LC色谱柱被污染或失效进样阀漏液峰型异常-峰开叉GC进样口污染色谱柱被污染样品被污染，混入难分离杂质检测器被污染LC保护柱污染柱失效样品被污染，混入难分离杂质分配系数(distributioncoefficient，K)在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度

8、、压力有关。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易