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1、附件8本科毕业设计（论文）开题报告毕业设计（论文）题目油脂降解菌的筛选题目类型题目来源系生命科学与工程系专业生物工程指导教师朱九滨职称讲师姓名唐成伦年级2008级学号2008128232一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等)随着人民生活水平的提高及餐饮业废水的增多,排放到水体中的油脂废水也日益增多,其成分复杂,有机物含量高。这些有机物如不经处理而排放到江河湖海后,飘浮于水体表面,影响水体的复氧及其自然净化过程,危害水体生态系统,严重污染周围环境[1、2]。然而,油脂相对于淀粉、蛋白等有机质要难于降解,所以找到一种高效、便捷的方法来处理餐饮废水中的油脂已解决这刻不容
2、缓的环境问题。而目前对于这种废水的处理方法主要有悬浮法、磁吸附分离法、粗粒化法、化学絮凝法、化学氧化法等物理化学方法,由于这些方法对COD、BOD的去除能力较低,而且投资大,占地广,流程复杂又需要特殊设备,其结果大都是对污染物的稀释、聚集或在不同环境中的迁移,还有产生二次污染的可能,而实际应用较少[3]。由于生物学方法处理污水成本低、无二次污染,因此广泛受到国内外学者[4、5]的重视。由于生物法是处理油脂污染物的一种最有效、最安全、最彻底的方法，再加之生物强化技术的应用可以充分发挥微生物的降解能力。同时生物法还可以与不同的处理系统相结合针对性地降解某种或某类目标污染物。微生物可
3、以利用油脂作为碳源和能源，使之成为甘油和和脂肪酸最终使油脂降解为水和二氧化碳[6]。因此此法是极具应用前景的油脂废水的处理方法。能够降解油脂的微生物在自然界中广泛存在,各类微生物对油脂的降解能力不尽相同,这主要依赖于微生物群落的种属组成,大量的研究都集中在混合菌株的降解作用研究上,而对单一菌株降解油脂的研究很少[1]。目前,日本、欧美一些发达国家已将油脂降解菌应用到生物垃圾降解、含油废水的处理、洗涤用酶和生物柴油的生产等多项领域,而我国对于这些方面的应用尚处于初步探索阶段。因此,筛选出高效的油脂降解菌,无论是对环境治理,还是对酶法生产生物柴油,都有着重要的意义。二、研究的主要内
4、容及预期目标通过实验室对菌种富集培养，然后经过分离、初筛、复筛过程，通过吸光度的测定对照标准曲线确定其对油脂的降解率，选择对油脂有较高的降解率的菌株作为试验所得菌株，然后通过观察菌落的形态以及革兰氏染色试验，然后查阅文献对菌株初步鉴定，为实际生产提供高效的油脂降解菌株和试验依据。三、研究方案（思路）1材料与方法1.1样品来源采自济宁学院学生食堂下水道口以及商业街小吃摊下水道口。1.2实验仪器SPX-250-Z生化培养箱、YSQ-LS-75S型不锈钢立式压力蒸汽灭菌器、电子天平、KYC-100C空气恒温摇床、100mL分液漏斗、SW-CT-ZFID超净工作台、T6型-可见紫外分光
5、光度计1.3培养基富集培养液：NaCl0.5g，牛肉膏0.5g，蛋白胨5.0g，豆油按周期加入，加水1,000mL,121℃灭菌20min中性红油脂培养基：NaCl5.0g，牛肉膏5.0g，蛋白胨5.0g，豆油10mL,0.6%中性红水溶液1mL,pH7.0，加水1,000mL,121℃灭菌20min复筛培养液:NH4NO30.2g,K2HPO40.5g，KH2PO40.5g，MgSO4·7H2O0.3g，豆油0.4mLpH7.2-7.4，用水1,000mL1.4试验方法1.4.1吸光度-油脂含量的标准曲线的绘制以石油醚为溶剂，以豆油为溶质配制0.0、0.1、0.2、0.3、0
6、.4、0.5、0.6、0.7mg/mL8个浓度的溶液，选择225nm作为紫外分光光度计工作波长，绘制出吸光度-油脂含量的标准曲线。1.4.2富集培养将采集到的样品用无菌水10倍稀释后充分混合，制成样液。取上述样液5mL到45mL富集培养基中，30℃，140r/min条件下震荡培养，并同时做3个平行样。每天检测，若油脂降解效果好则适量补加豆油。每4d为1周期，接种10mL菌液到40mL新培养液中以促进菌株的生长，富集持续4周期初始加油量随周期逐次递增，分别为1.6，2.4，3.2，4.0mL/L。1.4.3油脂分解菌的初筛从富集样品中选取油脂分解较充分的菌液，经适当稀释后，涂布于
7、中性红培养基上，观察菌落周围是否变红，若变红则表明菌株能够分解油脂产生脂肪酸[8]，将初筛出的菌株编号并记录菌落形态，后进行斜面保藏。1.4.4油脂分解菌的复筛将初筛获得的菌株分别接种到含30mL复筛培养液的100mL的锥形瓶中，30℃，200r/min，培养，72h后测定油脂含量，计算其对豆油的分解率。油脂含量的测定：采用紫外分光光度法测油脂含量[9,10]。取20mL水样移入100mL分液漏斗中，用20mL石油醚清洗采样瓶后，倒入分液漏斗，加入5mL硫酸酸化，再加2g氯化钠，充分震荡3m
