《细胞科学报告选题》PPT课件

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1、转基因动物转基因动物1982年美国华盛顿大学Palmiter等将大鼠生长激素基因导入小白鼠的受精卵里，再将这一受精卵植入借腹怀孕的母鼠体内，生下一个比正常体格大一倍的“超级小鼠”。按照转基因小鼠的思路，人们已经成功的获得了转基因大鼠、鸡、山羊、绵羊、猪、兔、牛、蛙、鱼等。转基因动物技术概念研制的方法技术的优点发展前景含外源基因的载体基因微注射移植受精卵小鼠出生转基因鼠的检测繁殖后代转基因动物一、转基因动物概述（一）转基因动物概念转基因动物是指通过基因工程对DNA进行体外操作，添加或删除一个特殊的DNA序列，然后导入早期的胚胎干细胞中，产生遗传结构得以修饰的动物，其改变的性状可以遗传给

2、后代。这些改变包括：（1）外源DNA片段至少整合到一条染色体上；（2）由于外源DNA的插入使任何一个基因发生改变；（3）由于外源DNA的插入或内源基因的删除使染色体发生重排；（4）有意识地导入可以持久存在的遗传实体。（二）转基因动物的命名1．符号(1)一个转基因符号由以下三部分组成：TgX(YYYYYY)＃＃＃＃＃Zzz，TgX=方式；(YYYYYY)=插入片段标示；＃＃＃＃＃=实验室指定序号；Zzz=实验室注册代号；(2)方式转基因符号通常冠以Tg字头。随后的一个字母（X）表示DNA插入的方式：H代表同源重组；R代表经过逆转录病毒载体感染的插入；N代表非同源插入。（3）插入片段标示

3、An匿名序列；Ge基因组；Im插入突变；Nc非编码序列；Rp报告基因；Sn合成序列；Et增强子捕获装置；Pt启动子捕获装置。2.举例C57BL/6J-TgN(CD8Ge)23Jwg：来源于美国杰克逊研究所（J）的C57BL/6品系小鼠被转入人的CD8基因组（Ge）；转基因在JonW.Gordon(Jwg)实验室完成，获取于一系列显微注射后得到的序号为23的小鼠。二、转基因动物的基本原理和方法（一）基本原理将改建后的目的基因用显微注射等方法注入实验动物的受精卵，然后将此受精卵再植入受体动物的输卵管中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物，人们可以通过转入外源基因培育优良品种的工程动物等

4、。1.外源目的基因的分离2.外源目的基因与转性基因表达启动子、增强子、报告基因等构件的拼接重组3.重组DNA导入生殖细胞或胚胎干细胞4.胚胎移植技术5.鉴定及筛选6.目的基因整合率及表达效率的检测（二）转基因动物的关键技术1.采取受精卵采取受精卵的方法分为获得自然排卵的受精卵的方法和以激素诱发排卵的方法，还有采取未受精卵，然后在体外受精的方法。2.向受精卵雄性原核注入DNA溶液通过微分干涉显微镜观察受精卵，会看到两个大的原核。两个核不久即可融合，接着核膜消失。雄性原核要比雌性原核能容纳更多的DNA溶液，一般是向雄性原核注入DNA溶液。3.向假妊雌小鼠移植（1）假妊雌小鼠的制作（2）将

5、操作卵移植至输卵管4.转基因动物的检测Ⅰ显微注射法Ⅱ逆转录病毒法原理：逆转录病毒的核酸为一条单链RNA分子，其基因由两部分组成，一是顺式作用序列，为病毒复制和整合所必需；二是反式作用序列，编码病毒的包装蛋白。将外源基因取代反式作用序列构建成重组载DNA。另外将包装蛋白基因导入专门的细胞并使之整合到染色体上，形成包装细胞。如果重组病毒DNA导入这种包装细胞中，病毒包装蛋白能将DNA包装成具有感染力的重组蛋白颗粒，能浸染动物细胞而将重组DNA引入宿主细胞。Ⅱ逆转录病毒法步骤：1.逆转录病毒载体的构建2.选择和培养包装细胞系3.重组病毒DNA导入包装细胞4.收集重组病毒颗粒5.感染胚细胞，

6、使细胞转化此法是目前制备转基因鸡最有效和最成功的方法。Ⅲ胚胎干细胞法胚胎干细胞是在人（哺乳动物）胚胎发育早期——囊胚（受精后约5—7天）中未分化的细胞。囊胚含有约140个细胞，外表是一层扁平细胞，称滋养层，可发育成胚胎的支持组织如胎盘等。中心的腔称囊胚腔，腔内一侧的细胞群，称内细胞群，这些未分化的细胞可进一步分裂、分化，发育成个体。由于内细胞群可以发育成完整的个体，因而这些细胞被认为具有全能性。当内细胞群在培养皿中培养时，我们称之为胚胎干细胞。利用胚胎干细胞法制备转基因小鼠的过程1.3.5天的孕鼠2.分离胚细胞3.转入培养皿中培养4.分离内层细胞团5.收集干细胞克隆6.酶处理解散细胞

7、7.培养干细胞8.转染干细胞9.植入代孕母鼠体内在胚胎干细胞基础上的基因打靶技术2007年诺贝尔生理学或医学奖分别授予两名美国人马里奥·卡佩基、奥利弗·史密斯和一名英国人马丁·埃文斯，以表彰他们在“基因靶向”技术方面的突出贡献。诺贝尔奖评审委员会发布的公报说，三位科学家“在涉及胚胎干细胞和哺乳动物ＤＮＡ重组方面有着一系列突破性发现”，为“基因靶向”技术的发展奠定了基础。在“基因靶向”技术的帮助下，科学家可以使小鼠体内的特定基因丧失功能。此类“基因敲除”试验