《疫检测与防治》PPT课件

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1、第11讲免疫学检测技术的基本原理免疫学检测方法：依据免疫学理论设计的测定抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子的实验方法。一、基本原理抗原与相应抗体特异性结合，并呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，以此检测抗原或抗体。第一节体外抗原抗体结合反应的特点及其影响因素㈠抗原抗体反应的特点1.抗原抗体结合的特异性抗原抗体结合除空间构型互补外，还以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等非共价方式结合，一定条件下复合物可解离成游离状态，且仍保持原有性质。2.抗原抗体结合的可逆性复合物解离度主要取决于特异性抗体超变区与相应抗原表位三维空间构型的互补程度，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，两者结合

2、越牢固，不易解离；反之，则容易发生解离。3.抗原抗体结合的比例与浓度抗原与抗体结合比例合适，则可形成肉眼可见的大结合物；反之形成肉眼不可见的小结合物。4.抗原抗体反应的阶段性第二阶段：可见反应阶段。数分钟、数小时至数日，因素影响多。第一阶段：特异结合阶段。仅几秒到几分钟、尚无可见反应；㈡抗原抗体反应的主要影响因素1.抗原和抗体浓度、比例2.电解质3.温度4.酸碱度二、血清学反应的种类1.凝集反应细菌、细胞等颗粒性抗原与相应的抗体，或表面包被抗原的颗粒状物质与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。2.沉淀反应毒素、组织浸液以及血清中的蛋白等可溶性抗原

3、与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物。3.免疫标记技术用酶、荧光素、同位素等物质标记抗体或抗原进行抗原抗体反应，检测抗原或抗体的技术。如免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫测定。第一抗体抗原第一抗体—抗原第二抗体生物酶第一抗体—抗原-第二抗体显色第二节免疫细胞的测定淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。一、淋巴细胞的分离常用ficoll（淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（PBMC），再经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离T细胞，可用尼龙毛柱、抗CD3单抗、E花结试验等分离。二、免疫细胞细胞的

4、鉴定根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同类型和比例。（一）T细胞功能测定1.T细胞增殖试验植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等丝裂原及抗CD3单抗等能非特异性激活培养的T细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。淋巴细胞功能测定在该增殖过程中，细胞DNA、RNA、蛋白质的合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原致敏的T细胞。（1）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁仪），易有放射性污染。（2）MTT法：该法操作简单，无放射性污染，但敏感性相对较差。淋巴细胞功能测定2.细胞毒试验：Tc、N

5、K细胞对靶细胞有直接杀伤作用，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶细胞。（1）51Cr释放法：用51Cr标记靶细胞，γ记数仪测定释放的51C活性。（2）MTT法：其原理与增殖试验相同，但甲生成量与靶细胞溶解破坏水平呈负相关。（3）乳酸脱氢酶释放法：细胞受损致膜通透性改变，乳酸脱氢酶释放到培养液中。3细胞因子检测：CK的检测有助于了解其在免疫调节中的作用，鉴定分离的淋巴细胞，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。常用的检测方法有以下三种：（1）ELISA法：（2）生物活性测定法：（3）聚合酶链反应（PCR）：淋巴细胞功能测定4皮肤实验正常机体对某种抗原产生细胞免疫后，用相同抗原

6、做皮肤试验时出现以局部红肿为特征的DTH。细胞免疫正常时出现阳性反应，细胞免疫低下则呈阴性反应。该方法简便，可帮助诊断某些病原微生物感染（如结核杆菌、麻风杆菌等）及免疫缺陷病等。淋巴细胞功能测定（二）B细胞功能测定B细胞介导体液免疫，检查B细胞的数量与功能是确定体液免疫是否正常的重要手段。1B细胞增殖试验2抗体形成细胞的测定：吸附有特异性抗原的SRBC与抗体形成细胞分泌的Ig特异性结合后活化补体，溶解SRBC。又称溶血空斑试验。第12讲免疫学防治“国防建设”学习要求：1.掌握人工主动免疫与人工被动免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。免疫学防

7、治：应用免疫学理论预防和治疗疾病，包括免疫预防和免疫治疗。一、疫苗1.定义：为预防、控制传染病的发生和流行，用于人体预防接种的生物制品。包括疫苗、菌苗和类毒素。2.基本要求：安全实用有效对绝大多数人群有保护性作用，使用后群体抗感染能力强，理想的疫苗：同时诱导细胞和体液免疫，维持时间长。接种程序简单，无严重不良反应，便于运输和储存，价格低。活疫苗要求遗传性状稳定，无返祖、致癌和致畸作用，无热原性和过敏原。抗感染抗肿瘤计划生育防止免疫病理损伤3.疫苗应用二、免疫预防方式免疫预防自然免疫：显性或隐性感染，胎儿从母亲获得人工免疫：人工