HCP残余检测

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1、专属性试剂盒开发根源：宿主细胞的分泌型蛋白和部分死亡细胞释放的结构蛋白成分复杂，不同的工艺，加上相关基因产物需要经过独特的翻译后修饰，这些都大大增加了HCP的品种数量和生化复杂性指导原则：中检院曾指出过“对于不同的目的蛋白质，根据分子量大小和等电点的不同，会采取不同的分离纯化工艺。不同的分离纯化工艺会导致细胞蛋白残留量和组成上的较大差异。只有根据不同的生产工艺，制备工艺特异的细胞蛋白标准品和特异的抗血清，建立相应的检测方法，才能更真实反应供试品的’细胞蛋白残留量。”覆盖率验证：Bio-RadLaboratories公司发布的HCP残留检测验证流程使用优化的2D分离条

2、件与转印方法可有效分离检测CHO、酵母、大肠杆菌等细胞系的全蛋白谱。将2DGel上的全蛋白转移至膜上，经ELISA试剂盒（商品化通用型或自制工艺特异型）内多克隆抗体孵育后进行WesternBlot化学发光检测，以确认ELISA试剂盒中的多克隆抗体能够与哪些宿主细胞蛋白结合。通过WesternBlot检测结果（多抗能检测到的HCP数量）与2D膜上检测结果（总HCP数量）的比较，即得出用于评价ELISA试剂盒特异性及适用性的MatchRate。2D-WB法的局限性§灵敏度低，只适用于上游样品的分析；§样品需要经过变性处理，一些表位可能会被破坏而不能被抗体识别；§银染的胶

3、与WB膜只能通过人工匹配操作，存在人为误差；§银染与WB的灵敏度本身存在差异，导致可信度不够高；方法，抗体的制备：一种是将空细胞按照已定的生产工艺进行发酵和纯化，然后将获得的东西免疫动物制备抗体。还有一种就是将工艺获得原液去除抗体后再免疫动物。标准品的制备：使用空载质粒转化到宿主细胞，按已定的生产工艺进行发酵纯化，纯化不需要走完纯化流程，可以走纯化流程的前几步即可。Cygnus除了传统的2D-WB的验证服务以外，还独家推出的更高特异性验证方法，Cygnus还独家研发更高特异性检测的方法：AAE（AntibodyAffinityExtraction）。该方法在样本处理

4、方式上做了非常大的改进，能够弥补2D-WB的缺陷，具有更高的特异性和灵敏度。AAE新型验证方法优势ü 独家样本处理方法：更高的灵敏度和特异性ü 可用于纯化后的样本分析，真正反映试剂盒对工艺过程中或终产物中残留的覆盖率ü 可直接通过仪器分析避免人工误差，结果可信度更高ü 已被FDA认可北京西美杰专属HCP检测抗体定制服务，专属HCP试剂盒开发服务存在的问题：1，宿主蛋白抗体制备周期长，免疫原性差的蛋白还不能产生抗体。此外，后期的ELISA检测方法，还得进行开发验证。这些工作都具有挑战性。2，确保低分子量，低免疫原性污染物与高分子量组分均被覆盖。