《生化制药》PPT课件

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1、1调整期：细菌代谢活跃，大量合成细胞分裂所需的酶类、ATP以及其他细胞成分2对数期：细菌代谢旺盛，个体的形态和生理特性比较稳定（调整期和对数期的细菌几乎不存在种内斗争）3稳定期：有害代谢产物积累，新增细胞数目与死亡细胞数目达到动态平衡，次级代谢产物大量积累，形成芽孢（稳定期的细菌种内斗争最激烈）4衰亡期：细菌数目急剧下降，出现畸形细菌（衰亡期的细菌和无机环境的斗争最激烈）基因组文库的构建步骤1、从组织或细胞提取基因组DNA；2、用限制性酶部分水解成适当长度的DNA片段，经分级分离选出一定大小合适克隆的DNA片

2、段；3、通常采用λ噬菌体或柯斯质粒载体等容载量较大的克隆载体，在适当位点将载体切开；4、将基因组DNA片段与载体进行体外连接；5、重组体DNA直接转化细菌或用体外包装的重组λ噬菌体颗粒感染敏感细菌细胞。最后得到携带重组DNA的细菌群体或噬菌体群体即构成基因文库。cDNA文库的构建步骤①从生物体或细胞中提取mRNA；②利用逆转录酶以寡聚核苷酸为引物合成cDNA的一条链；③利用DNA聚合酶I，以cDNA第一条链作为模板，用适当引物合成cDNA第二条链；④cDNA与载体的体外连接；⑤噬菌体的体外包装及感染或质粒的转化

3、。动物细胞培养基种类和组成动物血清的作用提供有利于细胞生长增殖所需的各种生长因子和激素；提供有利于细胞贴壁所需的贴壁因子和生长因子；提供可识别金属、激素、维生素和脂质的结合蛋白；提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素；提供良好的pH缓冲系统。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧反应生成葡萄糖酸和H2O2，生成的H2O2在过氧化物酶的作用下分解为水和原子氧，新生态的原子氧将无色的还原型邻联苯甲胺氧化成蓝色物质。颜色的深浅与样品中葡萄糖浓度成正比。随着样品中葡萄糖浓度的增加，酶试纸的颜色由粉红一紫红一紫色一蓝色，不断加深。其反

4、应过程如下：此酶试纸已在临床中用以测定血液或尿液中的葡萄糖含量，以诊断糖尿病。酶偶联法检测葡萄糖原理葡萄糖+O2葡萄糖酸+H2O2H2O2H2O+[O][O]+还原型邻联苯胺氧化型邻联苯胺（无色）（蓝色）葡萄糖氧化酶利用微生物技术，通过高度工程化的新型综合技术，以利用微生物反应过程为基础，依赖于微生物机体在反应器内的生长繁殖及代谢过程来合成一定产物，通过分离纯化进行提取精制，并最终制剂成型来实现药物产品的生产。发酵工程制药的定义1、微生物菌体的发酵SCP、药用真菌（冬虫夏草、茯苓等）生物防治制剂（如苏云金杆菌）

5、活性乳制剂细胞的生长与产物的积累成平行关系，生长速率最大的时期也是产物合成最高阶段。微生物发酵类型2、微生物酶发酵各种酶制剂：糖化酶、α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等天冬酰胺酶：抗癌纳豆激酶、链激酶：治疗血栓青霉素酰化酶：青霉素生产需要诱导或遭受阻遏、抑制等调控作用，在菌种选育、培养基配制以及发酵条件等方面需注意。3、微生物代谢产物发酵初级代谢产物：与菌体生长相伴随的产物、对菌体生长、分化和繁殖是必须的氨基酸、核苷酸、维生素、糖类等菌体对其合成反馈控制严密，一般不过量积累次级代谢产物：与菌体生长不相伴随，以初级代谢

6、的中间产物为原料而合成抗生素、生物碱、毒素、色素、胞外多糖等结构较复杂，对环境条件敏感4、微生物转化发酵利用微生物细胞的一种或几种酶，对外源化合物的特定部位进行加工，如加入羟基、还原双键、脱氧或切断支链等。反应最显著的特点是特异性强，包括反应特异性、结构位置特异性、立体特异性。如：甾体转化可的松（Cortisone）药用发酵产品分类生物来源作用对象作用机制化学结构细菌真菌放线菌抗菌药抗肿瘤药抗病毒药除草剂酶抑制剂免疫调节剂抑制细胞壁合成药影响细胞膜功能药干扰蛋白质合成药抑制核酸合成药抑制生物能量反应药抗生素维生

7、素氨基酸核苷酸甾体激素酶及酶抑制剂发展趋势利用DNA重组技术和细胞工程技术的发展、新的工程菌和新型微生物的开发；新型的生理活性多肽和蛋白质类药物：干扰素、白介素、促红细胞生成素等；新型菌体制剂和疫苗。红细胞生成素(治疗贫血)生长激素(促进生长)胰岛素(治疗糖尿病)干扰素(抗病毒、抗肿瘤)发酵菌种的选育要求生产力：能在廉价的培养基上迅速生长，所需的代谢产物的产量高，其它类似代谢产物少。操作性：培养条件简单，发酵易控制，产品易分离。稳定性：抗噬菌体能力强，菌种纯粹，遗传性状稳定、不易变异退化。安全性：非病源菌，不产

8、有害生物活性物质或毒素。从自然界中获得新菌种土壤、空气、动植物等，严重污染的水域，极端环境等基本程序：采样→预处理→富集培养→筛选→鉴定→野生型菌株诱变育种物理或化学方法诱发突变。物理诱变剂：紫外线、X-射线、γ-射线等化学诱变剂：氮芥、亚硝酸、5-氟尿嘧啶等杂交育种：借助有性重组，使不同菌株的遗传物质得以交换。原生质体融合育种：借助原生质融合技术实现遗传物质的交换。基因工程育种：DN