《油莎豆成分测定》PPT课件

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1、不同油莎豆品种块茎营养成分的比较分析1研究背景2研究内容3实验结果4结论1研究背景油莎豆又名油莎草、油莎果，地下结有大量块茎，块茎富含油脂、蛋白质、糖和淀粉，素有“地下核桃”之称。主要用于油粮、饲料、食品、医药、生物柴油、生物润滑油、沼气等行业产品的原料。油莎豆是目前油料作物中地下块茎产量最高的品种，故研究油莎豆的淀粉、脂肪和蛋白质等的含量对工业化提取具有现实意义。2实验内容1、不同品种油莎豆块茎中粗脂肪的含量测定2、不同品种油莎豆块茎中粗蛋白的含量测定3、不同品种油莎豆块茎中可溶性糖的含量测定4、不同品种油莎豆块茎中淀粉的含量测定5、不同品种油莎豆块茎中水分的含量测定

2、1、提取工艺流程油莎豆（磨成粉）正己烷溶解过滤正己烷提取液滤渣（粗蛋白）多次蒸馏出正己烷粗脂肪苯酚硫酸法考马斯亮蓝比色法旋光法可溶性糖蛋白质淀粉图1油莎豆营养成分测定工艺流程图2.1用浸提法测定油莎豆块茎中粗脂肪的含量操作方法：挑取干净饱满的油莎豆在75℃的干燥箱中烘干后粉碎粒度控制在95%通过80目筛称取2.00g豆粉正己烷浸泡溶解磁力搅拌器上搅拌2h后转入80℃恒温水浴锅中加热1h过滤掉残渣合并滤液于烧杯中在100℃的恒温水浴锅中加热蒸发掉正己烷再于干燥箱中干燥直至恒量所得到的黄色液体就是粗脂肪2.2用考马斯亮蓝法测定油莎豆块茎中粗蛋白的含量原理：用考马斯亮蓝G25

3、0法测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。2.2.1试剂的配制100μg／mL牛血清白蛋白标准溶液、考马斯亮蓝G-2502.2.2蛋白质标准曲线制作以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度作为横坐标作图得标准曲和回归方程：y=0.0048x+0.0004R2=0.99982.2.3样品处理取油莎豆粉1.00g转移到离心管中加入用10mL正己烷搅拌后静置0.5h然后在4000r/min离心1

4、0min弃去上清液得到粗蛋白重复三次后加入蒸馏水于离心管中搅拌溶解然后在4000r/min离心10min收集上清液重复三次再合并上清液定容于100ml的容量瓶中。再取待测样品提取液各0.1mL,再加入0.9mL蒸馏水，5.0mL考马斯亮蓝G—250试剂，充分混合，放置2min后，在595nm波长下比色记录吸光度。在标准曲线上查得相应的蛋白质含量（μg），按下式计算蛋白质含量。油莎豆蛋白质含量%＝V为提取液总体积(ml)C为提取液的蛋白质含量(μg/ml)W为油莎豆块茎(g)2.3用苯酚硫酸法测定油莎豆块茎中可溶性糖的含量原理：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛

5、能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在490nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。2.3.1试剂的配制70％乙醇，葡萄糖标准溶液（100μg/mL）：5%苯酚溶液（需要当天配制）2.3.2葡萄糖标准曲线制作以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度作为横坐标作图得标准曲和回归方程：y=0.0083x+0.0154R2=0.99912.2.3样品处理称取油莎豆粉1.00g放入离心管中再加入10mL正己烷充分搅拌在4000r/min

6、离心10min弃去上清液重复脱脂数次后再加入15mL70％乙醇搅拌使可溶性糖充分溶解然后在4000r/min离心10min收集上清液重复以上操作数次合并上清液于100mL容量瓶中取待测样品提取液1.0mL稀释于50ml的容量瓶，再取稀释液1.0ml于试管中，按标准曲线的测定方法依次加入试剂，在490nm波长下测吸光度。根据所测样品提取液的吸光度，在标准曲线上查得相应的可溶性糖含量。按下式计算：可溶性糖%=V为提取液总体积(ml)C为提取液的含糖量(μg/ml)W为油莎豆块茎(g)2.4用旋光法测定油莎豆块茎中淀粉的含量2.4.1原理：酸性氯化钙溶液与淀粉共煮时可使淀粉发

7、生轻度水解，同时钙离子与淀粉分子上的烃基络合，这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉分子由于具有不对称碳原子，因而有旋光性。所以利用旋光仪测定淀粉溶液的旋光度。2.4.2溶液的配制：氯化钙-乙酸溶液：溶液密度为1.3±0.02，pH值为2.3±0.02，30％硫酸锌溶液，15％亚铁氰化钾溶液2.4.3样品的处理：脱脂：称取油莎豆粉1.0g，放入离心管中，再加入10mL正己烷，用玻璃棒充分搅拌后，在4000r/min离心10min，弃去上清液，重复脱脂数次。脱糖：加入15mL70％乙醇，搅拌使可溶性糖充分溶解，然后在4000