《植物组织培养学有》PPT课件

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1、《植物组织培养学》实验宜春学院生命科学与资源环境学院园林教研室杨育红园艺教研室卢其能却志群实验一植物组织培养实验室参观一、目的要求通过本次实验，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具的使用方法。二、仪器用具组培室内的各种实验设备。三、实验内容1．介绍合理的组培室布局2．介绍实验设备和用具3．介绍实验的操作规程。四、作业将本此实训内容整理成实验报告。每人设计一个植物组织培养室的组建方案。（说明设计思路）超净工作台实验二MS培养基母液的配制与保存一、目的要求通过MS培养基

2、的母液配制和保存,掌握配制和保存培养基母液的基本技能.二、材料与用具1所需仪器及设备：天平、烧杯、定容瓶、量筒、蒸馏水、母液瓶、标签、冰箱等。2所需药品及试剂：配制MS培养基所需的药品、生长调节物质、蒸馏水、95%酒精、0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl三、方法步骤1．母液的配制根据MS培养基配方表配制六种母液。（详见附表）2．母液的保存（1）装瓶：将配制好的母液分别倒入瓶中，瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、吸取量与配制日期。（2）储藏：将母液瓶储放在冰箱内备用。四、作业1．整理实验报

3、告。2．列一张配制MS培养基母液成分表。配制MS培养基母液成分表母液种类成分规定量（mg/l）扩大倍数称取量（g）母液定容体积（ml）配1LMS培养基吸取量（ml）大量元素母液1NH4NO316505082.5100020KNO3190095.0MgSO4.7H2O37018.52Cacl2.2H2O44010022.0500103KH2PO41701008.550010微量元素5H3BO36.2500.31100020MnSO4.4H2O22.31.115ZnSO4.7H2O8.60.43KI0.830.0

4、415Na2MoO4.2H2O0.250.0125CuSO4.5H2O0.0250.00125Cocl2.6H2O0.0250.00125铁盐4Na2-EDTA37.31001.86550010FeSO4.7H2O27.81.390有机成分6肌醇1002005.02505甘氨酸20.1烟酸0.50.025VB60.50.025VB10.10.025实验三MS固体培养基的配制一目的要求通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。二材料与用具1所需仪器及设备：电炉、酸度计、高压湿热灭菌器2所需药品及试剂：

5、配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、0.1mol/lNaOH、0.1mol/lHcl、琼脂、蔗糖、蒸馏水3其他材料：移液管、量筒、定容瓶、培养瓶、标签、铅笔。三方法步骤1．按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸馏水的量筒母液一20ml母液二10ml母液三10ml母液四10ml母液五20ml母液六5ml2．加入生长调节物质：适配制的培养基而定。3．加入蔗糖：30g/l4．加蒸馏水定容后倒入锅中5．加入琼脂：6.5g/l（视琼脂质量而定）,后调节PH值(用1mol/l的NaOH或1mol/l

6、的HCL)6.熔化琼脂:在电炉上加热溶液,并不断搅拌,使琼脂熔化.7.培养基的分装四、作业1．整理实验报告注：（1）配制培养基时母液吸取量的计算：吸取量（ml）=（培养基中某成分的规定浓度（mg/l）*配制培养基的体积（l））/母液中某成分浓度（mg/l）（2）植物激素母液吸取量计算：吸取母液量（ml）=（培养基中激素浓度（mg/l）*配制培养基体积（l））/激素母液浓度（mg/ml）实验四愈伤组织的诱导一、目的要求本次试验，首先通过在无菌操作台上进行无菌操作训练，使学生初步掌握组织培养的无菌操作技术。其次，

7、通过本次实验是了解并掌握愈伤组织诱导的基本程序和方法。二材料与用具1所需仪器及工具：超净工作台、70%酒精、95%酒精、接种器械（主要指剪刀、镊子等）、培养材料或外植体、0.1%的升汞、无菌水等。2愈伤组织诱导培养基：MS+2.4-D1.0+KT0.2或B5+2.4-D1.0+KT0.2三、方法步骤1．进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子、鞋子。2．打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌操作室内的紫外灯，照射20分钟（进行紫外灭菌）3．进行外植体预处理（即对植物组织进行修整，去掉不

8、需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。）4．照射20分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用70%的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消毒和接种工作。5．用蘸有70%的酒精的纱布擦拭装有培养基的培养瓶，放进工作台。6．把接种器械浸泡在95%酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上。7．胡萝卜种子经75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2遍，再用0.1%升汞浸泡10分钟，无菌水冲洗3-5次后，接种于不