微滴式数字PCR技术用于生物样品种属鉴定和绝对定量

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1、万方数据·342·JoumalofForensicMedje五le，0c切ber2014，V01．30，N0．5微滴式数字PCR技术用于生物样品种属鉴定和绝对定量胡伟，陈荣华，张晨，安志远，王斌，平原f上海市公安局物证鉴定q-心法医物证学现场应用技术公安部重点实验室上海市现场物证重点实验室，上海200083)摘要：目的运用微滴式数字PCR技术进行生物样品的种属鉴定和绝对定量。方法选择人mtDNA两个编码基因ND4和』舔rRNA．设计特异性引物与探针，用人来源及常见动物样本验证种属特异性，再用重组质粒和2组共16份人来源生物检材．倍比稀释。使用微滴式数字PCR技术进行种属

2、检验和绝对定量，验证其灵敏度和稳定性。结果人重组质粒FAM(ND4)可进行人来源样品的检测，其检测结果与各级稀释梯度基本吻合．微滴式数字PCR技术可以检测出反应体系中低至单拷贝的DNA。结论微滴式数字PCR技术可以进行生物样品的种属鉴定和绝对定量，并具有很高的灵敏度和特异性，可应用于日常法医物证检验。关键词：法医遗传学；聚合酶链反应；种属鉴定；绝对定量；微滴式数字PCR中图分类号：DF795．2文献标志码：Adoi：10．3969／j．issn．1004—5619．2014．05．006文章编号：1004—5619(2014)05—0342—04SpeciesIdent

3、ificationandAbsoluteQuantificationofBiologicalSamplesbyDropletDigitalPCRHUWei．CHENRong=hua,ZHANGChert，ANZhi-yuwz，WANGBing；PlNGYuwz(ShanghaiKeyLaboratoryofCrimeSceneEviderice，KeyLaboratoryofForensicEvidericeandScienceTechnology,MinistryofPublicSecurity,[nstituteofForensicScience，ShanghaiP

4、ublicSecurityBureau,Shanghai200083，China)Abstract：ObjectiveTotestdropletdigilalPCRforspeciesidentificationandabsohtequanfifScationofbiologicalsample．MethodsSpecificprrneIsandprobesforhum311m1DNAencod五NgeneND4and16SrRNAweIedesigned，and1hespecjes-soecJfici眵waSassessedonDNAsamplesderivedfro

5、mhum311andcommona11面alaT0dete坷he1hesensiliv匆andslabilityofdropletdigilalPCRforspecjesidenlifica_*ionandabSOlu乜qumlfification．gradJetltdihdonseriesofIeCOBlb如a11tP]a8咀jdand16huma11DNAsamplesweIeFtllaⅣzed．ResultsHum313Imcomb衲antP]a鲫耐FAM(ND4)COUldbeusedndelecljrlg1hesamPlesofhum3i3．And1heIeS

6、Ilkofdelec血gweIeconsislentwflhalllevelSofdilutedconcen虹alions．DmpletdigilalPCRwaSable扔de乜ctbwandshglecopyoflaIgetDNA．ConclusionDmpletdigilalPCR，w讪highsensiliv匆andspecific匆，面funy8menableforspeciesidenlifjealionandabSOhtequanlificalionofbiobgicalsamP]e&alsoitC3IIbeappliedon101]血eforensicex

7、amhation．Keywords：fomnsjegenetics；pokmeIasechahreaction：speciesidentification：abSOlmequantification：dropletdigilalPCR法医DNA检验中，种属鉴定和定量是重要的工作内容之一。目前利用线粒体DNA(mtDNA)的种属特异性对各种腐败和降解生物学检材进行种属鉴定已成为目前法医学种属鉴定研究与应用的方向之一，常用的方法有毛细管电泳法和实时荧光定量PCR技术。但这两种检验方法对于样本DNA的含量都有一基金项目：公安部科技强警基础3-作