GBT 13080.2-2005 饲料添加剂 蛋氨酸铁(铜、锰、锌)螯合率的测定 凝胶过滤色谱法

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1、ICS65.120B46通,中华人民共和国国家标准GB/T13080.2-2005饲料添加剂蛋氨酸铁(铜、锰、锌)鳌合率的测定凝胶过滤色谱法Feedadditive-Determinationofchelationpercentageofiron,copper,manganeseandzincmethionine-Gelfiltrationchromatography2005-09-05发布2006-02-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会GB/T13080.2-2

2、005月g舌本标准是在国内生产实际基础上研究制定的。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(武汉)、长沙兴嘉生物工程有限公司、广州康瑞德生物技术有限公司。本标准主要起草人:杨林、杨海鹏、杨先奎、刘贤荣、黄逸强、陈玻、钱沁。GB/T13080.2-2005饲料添加剂蛋氨酸铁(铜、锰、锌)鳌合率的测定凝胶过滤色谱法范围本标准规定了用凝胶色谱法测定蛋氨酸、经基蛋氨酸与可溶性铁、铜、锰、锌盐反应生成的赘合物鳌合率的方法本标准适用于蛋氨酸铁、蛋氨酸铜、蛋氨酸锰、蛋氨

3、酸锌、经基蛋氨酸铁、经基蛋氨酸铜、经基蛋氨酸锰、经基蛋氨酸锌等鳌合物赘合率的测定。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(neqISO3696:1987)GB/T13885饲料中铁、铜、锰、锌、镁的测定原子吸收光谱法GB/T14699.

4、1饲料采样原理试样在水中加热、离心后，分成沉淀和溶液两部分。溶液中所含的可溶性氨基酸鳌合物及金属离子经过凝胶分离，在规定条件下洗脱，金属离子形成氢氧化物沉淀，将固定在凝胶柱顶端无法洗脱，可溶性氨基酸鳌合物则可通过配体氨基酸的携带从凝胶柱上洗脱下来，实现和金属离子的分离;可溶性氨基酸赘合物洗脱分离完成后，加人EDTA溶液洗脱，使金属离子从色谱柱上洗脱。用原子吸收光谱法测定沉淀态氨基酸赘合物、可溶性氨基酸鳌合物及金属离子的含量，分别计算出沉淀态氨基酸鳌合物、可溶性氨基酸鳌合物占金属元素总量的比例即可计算出相应

5、的氨基酸鳌合物的鳌合率试剂和溶液实验用水应符合GB/T6682中二级用水的规格。所用试剂除特殊规定外，均为分析纯。4.1氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.1mol/L]:称取2.00g氢氧化钠溶于500ml,水中，混匀。4.2硼酸溶液[c(H,BOO=0.4mol/L习:称取12.28g硼酸溶于500ml_水中，混匀。4.3氯化钾溶液[c(KCD=0.2mol/L]:称取7.455g氯化钾溶于500mL水中水，混匀。4.4洗脱液的配制4.4,，pH7.。的洗脱液:分别量取1.0mL氢氧化钠溶液(4.1),

6、12.5mL硼酸溶液(4.2),12.5mL氯化钾溶液04.3)，注人100ml，容量瓶，用水稀释至刻度4.4.2pH9.0的洗脱液:分别量取20.8mL氢氧化钠溶液(4.1),12.5ml硼酸溶液(4.2),12.5mL氯化钾溶液(4.3)，注人100mL容量瓶，用水稀释至刻度。4.4.3pH10.。的洗脱液:分别量取43.7mL氢氧化钠溶液(4.1),12.5mL硼酸溶液(4.2),12.5mL氯化钾溶液(4.3)，注人100m工容量瓶，用水稀释至刻度。4.5乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液「c(ED

7、TA)=0.1mol/L]:称取37.2g乙二胺四乙酸二钠加热溶于100mL水中，混匀。GB/T13080.2-20054.6葡聚糖凝胶:G-15,4.7盐酸溶液:将1体积的盐酸加人到10体积的水中，混匀。5仪器5.1恒温水浴锅:300C^-80℃可调5.2原子吸收分光光度计:波长范围190nm-900n5.3离心机:3000r/min.5.4色谱柱:长300mm，内径9mme5.5恒流泵。6试样制备按GB/T14699.1取有代表性的样品至少2kg，用四分法缩减至约250g，粉碎过。.42mm孔筛，混匀

8、，装人样品瓶内密闭保存，备用。7测定步骤7.1试样预处理称取试样约0.5g，精确到0.0002g,置于25mL离心管中，加人15mL水，于60℃水浴中加热30min，不时搅拌，使试样充分溶解，用离心机于3000r/min离心10min。将上清液小心移人25mL容量瓶中，沉淀分别用4mL热水(600C)洗涤、离心三次，上清液一并移人25mL容量瓶中，定容，得到可溶性氨基酸赘合物及游离金属离子溶液，称为溶液A。沉淀用10mL盐酸溶