DB41T 708-2011 规模牛场口蹄疫监测技术规范

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1、DB41河南省地方标准DB41/T708—2011规模牛场口蹄疫监测技术规范2011-12-20发布2011-12-20实施河南省地方标准公共服务平台河南省质量技术监督局发布DB41/T708—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由河南省畜牧局提出并归口。本标准由河南省动物疫病预防控制中心负责起草，中国动物疫病预防控制中心参加起草。本标准主要起草人：张志凌、王功民、吴志明、张健、闫若潜、方先珍、谢彩华。河南省地方标准公共服务平台IDB41/T708—2011规模牛场口蹄疫监测技术规范1

2、范围本标准规定了规模牛场口蹄疫监测样品的采集和保存、监测方法和方式、监测结果的处理。本标准适用于规模牛场口蹄疫监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18935－2003口蹄疫诊断技术中华人民共和国农业部《口蹄疫防治技术规范》中华人民共和国农业部公告第503号《高致病性动物病原微生物菌(毒)种或者样本运输包装规范》3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1酶联免疫吸附试

3、验（ELISA）一种酶联免疫技术。用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。4样品的采集和保存要求4.1样品的采集和保存4.1.1组织样品4.1.1.1样品的选择用于病毒分离、鉴定的样品应选择牛未破裂的舌面或蹄部、鼻镜、乳头等部位的水疱皮和水疱液。对临床健康但怀疑带毒的牛可在扑杀后采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品作为检测材料。4.1.1.2样品的采集和保存

4、4.1.1.2.1水疱样品采集部位可用清水清洗，不应使用酒精、碘酒等消毒剂消毒、擦拭。河南省地方标准公共服务平台1DB41/T708—20114.1.1.2.2未破裂水疱中的水疱液用灭菌注射器采集不少于1mL，装入灭菌小瓶中，加抗菌素（青-1-1霉素终浓度为10000IU·mL,链霉素终浓度为10mg·mL），加盖密封并用胶带封口，及时冷冻保存。4.1.1.2.3剪取新鲜水疱皮3g～5g放入灭菌小瓶中，加2倍体积的50％甘油/磷酸盐缓冲液(pH7.4),加盖密封并用胶带封口，冷冻保存。4.1.1.2.4在无法采集水疱

5、液和水疱皮时，应采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品3g～5g装入灭菌的小瓶内,加盖密封并用胶带封口，冷冻保存。4.1.1.2.5每份样品的包装瓶上均要贴上防水标签，并写明采集地点、样品编号、动物种类、时间等。4.1.2牛食道-咽部分泌物(O-P液)样品4.1.2.1样品的采集4.1.2.1.1被检动物应在采样前禁食(可饮水)12h，以免反刍胃内容物严重污染O-P液。4.1.2.1.2采样探杯在使用前经0.2％柠檬酸或2％氢氧化钠溶液浸泡5min，再用蒸馏水反复冲洗3次以上。每采完一头牛,探杯应重复进行消毒和清洗。4.1

6、.2.1.3采样时动物站立保定，将探杯随动物吞咽动作送入其食道上部10cm～15cm处，轻轻来回移动2～3次，然后将探杯拉出。如采集的O-P液被反刍胃内容物严重污染，应用生理盐水或自来水冲洗口腔后重新采样。4.1.2.2样品的保存将采集到的8mL～10mLO-P液倒入大于25mL的灭菌玻璃容器中,容器中应事先加有8mL～-110mL细胞培养液或磷酸盐缓冲液（0.04mol·L、pH7.4），加盖密封后充分摇匀，贴上防水标签，并写明采集地点、样品编号、动物种类、时间等，及时放入冷藏箱内，12h内转往-15℃以下冰箱冻存

7、。4.1.3血清采集牛群发生疑似疫情而错过组织样品采集时机时，应无菌操作采集动物血液，每头不少于10mL。-1自然凝固后无菌分离血清装入灭菌小瓶中，加适量抗菌素（青霉素终浓度为10000IU·mL，链霉素-1终浓度为10mg·mL），加盖密封后2℃～8℃冷藏保存。每份样品的包装瓶上应贴上防水标签，并写明采集地点、样品编号、动物种类、时间等。通过抗体检测，做出追溯性诊断。4.2样品登记采集样品后应及时填写样品采集登记表，一式3份（参见附录A）。4.3样品的运送4.3.1将采集好的样品装入金属套筒中，套筒应填充防震材料，

8、加盖密封，与采样记录一同装入专用运输容器中。专用运输容器应隔热坚固，内装适当冷冻剂和防震材料。4.3.2外包装上应加贴生物危险警示标识及警告语，并符合《高致病性动物病原微生物菌(毒)种或者样本运输包装规范》要求。样品应于24h内运送到检测单位。4.3.3送检材料河南省地方标准公共服务平台应附有符合4.2样品采集登记表。2DB41/T708—20