安捷伦GPC软件培训

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1、AgilentGPC软件现场培训教材安捷伦科技有限公司化学分析仪器部一.仪器配置：•单元泵(G1310A)•在线脱气机(G1379A)•自动进样器(G1313A)•柱温箱(G1316A)•视差折光检测器(G1362A)•化学工作站(G2170AA,G2182AA)•GPC-SEC有机相起始套包（PN:5064-8251）•GPC-SEC水相起始套包（PN:5064-8252）注：如果使用二元泵或四元泵，千万不要使用泵的比例阀进行混合。在使用二元泵情况下，严格使用100%通道A和0%通道B。四元泵的连接应使梯度比例阀旁路，这需要一个转换接头(P/N0100-1847)以便使溶剂

2、直接到达主动阀而不是比例阀。本培训操作以GPC-SEC有机相起始套包为例：•色谱柱：•安捷伦PLgelMixed-C,300x7.5mm,5µm(79911GP-MXC)此PLgelMixed-C色谱柱填料为5µm不同孔径的颗粒，因而可以使分子量范围很宽的高聚物得到分离（约200-3,000,000），这样宽的分子量范围一般需要几根（通常2到3根）传统意义上单一孔径的色谱柱串联完成。另一方面，一根30cm长混合gel色谱柱不可能与一套串联色谱柱具有相同的柱效。因此该混合柱通常用于方法的快速开发，其优化需要使用几根混合柱或单一柱串联来完成。二.样品制备：•为节约时间，样品制备和

3、仪器参数的设置最好在前一天的下午来完成，这样可以使日RI检测器和色谱柱有足够的时间平衡过夜。1.分别加入1.0mLTHF到三个含有窄标聚苯乙烯标样混合物的小瓶中(红,蓝和绿)以及一个宽标样品瓶（黄色）中，让其溶解60分钟，每10分钟摇动一次。在样品加入溶剂后其使用不应超过2天。2.通电打开GPC系统各模块。3.确认系统在使用THF时没有盐析出且没有溶剂不互溶的现象，否则用水或过渡溶剂异丙醇充分冲洗系统。4.添加1L含有稳定剂的THF到1100单元泵的溶剂瓶中。（对于四元泵只用A通道）5.打开Purge阀并以5mL/min流量purge该通道10分钟。6.关闭purge阀并在不

4、接色谱柱的情况下以1mL/min流量冲洗泵，自动进样器和柱温箱至少5分钟。2三.仪器参数：•分析条件:1.如果GPC软件版本为A.02.01或更高你可以从硬盘中调入下列方法：路径C:hpchemXMethods(此处X仪器号)或者根据下列参数建立:•OK_STAN.M–用于分析聚苯乙烯标准•OK_SAM.M–用于分析宽带聚苯乙烯测试样品这两个方法的不同在于积分参数和运行时间表”RunTimeChecklist”。对于窄标标准品和宽带聚苯乙烯样品需要不同的积分参数是因为它们不同的峰形，当然也可以对这些参数进行调节以满足GPC系统对峰鉴定的要求。高聚物窄标标准品的分析是传统

5、的HPLC分析，不需要在运行时间表中激活GPC数据分析软件。方法参数：对于聚苯乙烯标准的积分参数：（AK_STAN.M）：3对于宽带聚苯乙烯测试样品的积分参数：（方法AK_SAM.M）：（对于每个系统的保留时间和峰形需做特殊调节）：2.改变流速到0.5mL/min3.在柱温箱中安装色谱柱，连接色谱柱入口到自动进样器，出口到RI检测器，以0.5mL/min的流速冲洗色谱柱30min以置换色谱柱中的溶剂（甲苯），在此期间PurgeRI检测器的参比池。4.提高流速到1mL/min并维持至少2小时直到基线稳定。5.为了获得更好的精确度和准确度，建议在此条件下过夜。四.数据采集：1.建

6、立一个序列对每个样品各进样一次，进样量为50uL2.检查基线稳定性并运行序列。3.使用HPLC级THF为流动相和样品溶剂的典型色谱图如下所示：4标准谱图前四个峰为窄标聚苯乙烯随分子量降低的顺序流出。在最后一个标准峰流出后的单体峰是由于溶剂不纯所致，如果你使用含有稳定剂的5THF，你会看到一个大的稳定剂负峰。其他的负峰主要由于进样期间的压力降所致。注意这些单体和压力降造成的峰会因仪器以及流动相和所使用的样品溶剂不同而不同。上图为典型的聚苯乙烯（宽标）测试样品谱图（黄色瓶）五.GPC系统的校正与样品分析：•如何做窄标校正1.切换到或开启化学工作站并进入到"DataAnalysis

7、"画面。2.从DATAGPC_DEMO子目录调入数据文件002-0201，此数据含有使用RI检测器检测的聚苯乙烯标样混合物。3.通过GPC

8、GPC-Settings...检查并修改GPC设置参照下图：64.从GPC菜单选择“CalculateGPC-Results”，GPC-Addon软件将打开并已经设置好基线，缺省的default.cal校正曲线用于产生分子量数据。但是，这些分子量肯定不对，因为缺省的数据还没有与实际数据相关联。现在我们可以根据峰保留体积和已知的摩尔质量建立校正表：1.单击Windo